ROSCO酵母樣真菌藥敏片

使用改良SHADOMY瓊脂，適用于所有的抗真菌藥，主要成分包括酵母氮瓊脂基礎(chǔ)，葡萄糖和天冬氨酸，通過磷酸緩沖液控制pH7.0。同時添加氯霉素控制細(xì)菌的污染。

采用NCCLS推薦的RPMI-1640瓊脂也是可以的。

接種液的配制和接種

接種液的配制中，濃度度的控制是zui為重要的，接種液過濃會導(dǎo)致比咯類/咪唑類抑菌圈判度困難，而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。對于大多數(shù)的菌株，接種液濃度為5X10⁵CFU/ml（先配0.5麥?zhǔn)蠞岫?，再用生理鹽水1：1稀釋）；

對于克柔氏念珠菌（C. krusei），先配0.5麥?zhǔn)蠞岫龋儆蒙睇}水1：10稀釋；

對于隱球菌屬（Cryptococcus），配1.0麥?zhǔn)蠞岫?，無需稀釋。

在接種前，平板先置35℃干燥20-25分鐘。對于9cm平皿吸0.5ml接種液，14cm平皿吸1.0ml接種液，傾注于平板表面，涂布均勻，用移液管吸走多余的液體。然后，平皿在35℃干燥10分鐘，貼藥片。zui終要求，在瓊脂表面，菌落恰呈融合生長。

注：也可以按K-B法，用棉拭子沾取菌懸液，無需擠干，直接均勻涂布平板即可，這樣的操作比較簡單

培養(yǎng)條件

在多數(shù)情況下，應(yīng)在35℃培養(yǎng)18-24小時后馬上測量抑菌圈，因為培養(yǎng)時間過長會導(dǎo)致假耐藥，特別是對于咪唑/比咯類藥物。即培養(yǎng)過夜后應(yīng)檢查平板，如果抑菌圈清晰，應(yīng)馬上測量。如果對于某些菌株在培養(yǎng)過夜后未見生長，那么應(yīng)再培養(yǎng)多24小時。而對于隱球菌屬（Crytococcus spp）在30℃培養(yǎng)42-48小時。

判讀標(biāo)準(zhǔn)

基本判讀標(biāo)準(zhǔn)（局部治療用）

注：

s 對于多烯類抗真菌藥（包括兩性霉素B和制霉菌素），測量無可見生長的清晰的抑菌圈，抑菌圈出現(xiàn)的菌落必須視為耐藥突變株

s 對于比咯/咪唑類抗真菌藥以及特比奈芬，在正常生長菌落形成的抑菌圈內(nèi)，可能會出現(xiàn)由較小的部分被抑制的菌落形成的抑菌圈。測量時以正常生長的菌落形成的抑菌圈為準(zhǔn)，其內(nèi)部的較小菌落不應(yīng)視為突變株。

s 對于氟胞嘧啶，同樣以正常生長的菌落形成的抑菌圈為準(zhǔn)，抑菌圈內(nèi)的單個菌株通常為耐藥突變株（重新分離和試驗）。

我們認(rèn)為對于從嚴(yán)重的系統(tǒng)感染病人分離到的酵母菌，應(yīng)遵循更為嚴(yán)格的判度標(biāo)準(zhǔn)。因為系統(tǒng)感染分離到的一些菌株（如熱帶念珠菌，克柔氏念珠菌，光滑擬酵母，啤酒酵母）對咪唑/比咯類藥物的敏感性降低，同時，我們參照NCCLS提供的MIC折點標(biāo)準(zhǔn)，對于這些分離株，在SHADOMY平板或RPMI1640平板上，我們建議使用以下判度標(biāo)準(zhǔn)：

嚴(yán)重系統(tǒng)性感染株判度標(biāo)準(zhǔn)

注：氟胞嘧啶10ug推薦用于黑曲霉試驗，而氟胞嘧啶1ug適用于念珠菌和其它酵母菌。

對比咯類藥物的耐藥是一種漸進(jìn)的現(xiàn)象，耐藥是微小突變的不斷累積的結(jié)果。在任何比咯類藥物的選擇壓力下，對氟康唑的MIC逐步上升，或者說抑菌圈直徑減少。如果分離株對氟康唑的MIC＞4.0ug/ml，那么該株對其它比咯類藥物的敏感性也將下降，但不同菌株的下降情況不盡相同。如果分離株對氟康唑的MIC≤2.0，則對其它比咯類藥物依然敏感。

酵母紙片藥敏的質(zhì)控

0.5麥?zhǔn)蠞岫龋?：1稀釋，培養(yǎng)18-24小時