詳細(xì)介紹
藥敏改良羅氏培養(yǎng)基(比例法)說明書 | |||||||||||||||||||||||||
【產(chǎn)品名稱】 【儀器設(shè)備】 本實(shí)驗(yàn)需要主要的儀器設(shè)備有生化培養(yǎng)箱、生物安全柜、接種環(huán)、麥?zhǔn)媳葷峁埽ǎ⒁埔簶專ɑ蛞埔汗埽?、高壓滅菌鍋?/span> 【操作方法】 1、菌液濃度標(biāo)定及接種菌液的準(zhǔn)備: 1.1 樣品來源于液體培養(yǎng)基: 液體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽性或復(fù)蘇培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌,取培養(yǎng)2周以內(nèi)菌液,經(jīng)4000g,15分鐘離心,取沉淀。沉淀用無菌0.5%Tween80生理鹽水稀釋,與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液; 1.2 樣品來源于固體培養(yǎng)基: 挑取固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌菌落,利用無菌的0.5% Tween80生理鹽水溶解、稀釋,與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液; 附:麥?zhǔn)?號比濁管的制備方法: 0.1mL 1%氯化鋇(BaCL2)加入9.9mL 1%硫酸(H2SO4),封口,比濁前搖勻。 1.3 菌懸液稀釋制備接種濃度: 比濁后的菌懸液, 利用無菌的 0.5% Tween80 生理鹽水10 倍比稀釋, 稀釋到接種濃度分別為: 10-2mg/mL和10-4mg/mL; 提示: ① 此操作要求在生物安全柜中進(jìn)行; ② 菌液標(biāo)定稀釋前,要保證菌樣沒有污染,如果菌樣中含有除了結(jié)核分枝桿菌,還存在其他抗酸菌,藥敏結(jié)果不準(zhǔn)確; ③ 樣品來源于固體培養(yǎng)基,結(jié)核分枝桿菌*是在培養(yǎng)基上出現(xiàn)陽性克隆后,14天內(nèi)挑取,進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn); ④ 0.5%Tween80生理鹽水使用前,需要高壓滅菌; 2、接種: 接種濃度分別為10-2mg/mL和10-4mg/mL,標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)取0.01mL,分別接種到對照培養(yǎng)基及含藥培養(yǎng)基表面; 提示: 接種菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)斜面上; 3、培養(yǎng): 接種后的培養(yǎng)基置于斜面處37℃培養(yǎng),松開蓋子,培養(yǎng)24~48h后,旋緊蓋子繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)4周; 4周后,當(dāng)對照培養(yǎng)管的菌體生長良好后,進(jìn)行下一步菌體藥物敏感性鑒定,報(bào)告結(jié)果;如果對照培養(yǎng)管菌體沒有生長,重新實(shí)驗(yàn); 【結(jié)果判定】 菌液接種藥敏培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)4周后, (1)觀察培養(yǎng)結(jié)果: ① 無菌落生長:對藥物敏感 — ② 少于50個(gè)菌落:實(shí)際菌落數(shù); ③ 50~100菌落: 1+ ④ 100~200個(gè)菌落: 2+ ⑤ 大部分融合 (200~500個(gè)菌落) 3+ ⑥ 融合(大于500個(gè)菌落) 4+ (2)計(jì)算耐藥百分比: 如果耐藥百分比大于1%者報(bào)告耐藥;則認(rèn)為受試菌對該抗結(jié)核藥耐藥;
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