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改良羅氏藥敏培養(yǎng)基

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更新時(shí)間:2018-09-27 00:00:00瀏覽次數(shù):794

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產(chǎn)品簡介

藥敏改良羅氏培養(yǎng)基(比例法)24支×1盒每盒包裝兩套藥敏培養(yǎng)基,每套有兩組,共24支

詳細(xì)介紹

 藥敏改良羅氏培養(yǎng)基(比例法)說明書

【產(chǎn)品名稱】
    藥敏改良羅氏培養(yǎng)基(比例法)
【產(chǎn)品用途】
    主要用于檢測臨床或?qū)嶒?yàn)室分離出的結(jié)核分枝桿菌,對抗結(jié)核一線藥異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素的敏感性情況;
【主要成分
    本產(chǎn)品的主要成分是谷氨酸納、磷酸二氫鉀、 硫酸檸檬酸鎂、丙三醇、新鮮雞卵液、 2%孔雀綠水溶液以及抗結(jié)核菌抗生素,抗生素分別是異煙肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、鏈霉素(SM);
【實(shí)驗(yàn)原理】
    本產(chǎn)品主要利用比例法進(jìn)行分枝桿菌藥敏性實(shí)驗(yàn)。取液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基培養(yǎng)陽性的分枝桿菌,調(diào)整一定濃度,分別接種到不同藥敏培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)4周,如果空白對照培養(yǎng)管中,結(jié)核菌生長良好,進(jìn)行下一步結(jié)核菌藥物敏感性鑒定;如果結(jié)核分枝桿菌在空白對照培養(yǎng)管沒有生長,需要重新實(shí)驗(yàn)。
藥物敏感性鑒定:37℃培養(yǎng)4周后,觀察結(jié)果并計(jì)算耐藥百分比:

   
  如果耐藥百分比< 1% 者報(bào)告敏感(S);耐藥百分比≥1%者報(bào)告耐藥(R);
【儀器設(shè)備】
    本實(shí)驗(yàn)需要主要的儀器設(shè)備有生化培養(yǎng)箱、生物安全柜、接種環(huán)、麥?zhǔn)媳葷峁埽ǎ⒁埔簶專ɑ蛞埔汗埽?、高壓滅菌鍋?/span>
【操作方法】
 1、菌液濃度標(biāo)定及接種菌液的準(zhǔn)備:
 1.1 樣品來源于液體培養(yǎng)基:
       液體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽性或復(fù)蘇培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌,取培養(yǎng)2周以內(nèi)菌液,經(jīng)4000g,15分鐘離心,取沉淀。沉淀用無菌0.5%Tween80生理鹽水稀釋,與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液;
 1.2 樣品來源于固體培養(yǎng)基:
       挑取固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌菌落,利用無菌的0.5% Tween80生理鹽水溶解、稀釋,與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland )比濁,即配成1mg/mL的菌懸液;
 附:麥?zhǔn)?號比濁管的制備方法:
       0.1mL 1%氯化鋇(BaCL2)加入9.9mL 1%硫酸(H2SO4),封口,比濁前搖勻。
 1.3 菌懸液稀釋制備接種濃度:
       比濁后的菌懸液, 利用無菌的 0.5% Tween80 生理鹽水10 倍比稀釋, 稀釋到接種濃度分別為: 10-2mg/mL和10-4mg/mL;

提示:
 ① 此操作要求在生物安全柜中進(jìn)行;
 ② 菌液標(biāo)定稀釋前,要保證菌樣沒有污染,如果菌樣中含有除了結(jié)核分枝桿菌,還存在其他抗酸菌,藥敏結(jié)果不準(zhǔn)確;
 ③ 樣品來源于固體培養(yǎng)基,結(jié)核分枝桿菌*是在培養(yǎng)基上出現(xiàn)陽性克隆后,14天內(nèi)挑取,進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn);
 ④ 0.5%Tween80生理鹽水使用前,需要高壓滅菌;
 2、接種:
    接種濃度分別為10-2mg/mL和10-4mg/mL,標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)取0.01mL,分別接種到對照培養(yǎng)基及含藥培養(yǎng)基表面;
 提示:
    接種菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)斜面上;
 3、培養(yǎng):
    接種后的培養(yǎng)基置于斜面處37℃培養(yǎng),松開蓋子,培養(yǎng)24~48h后,旋緊蓋子繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)4周;
    4周后,當(dāng)對照培養(yǎng)管的菌體生長良好后,進(jìn)行下一步菌體藥物敏感性鑒定,報(bào)告結(jié)果;如果對照培養(yǎng)管菌體沒有生長,重新實(shí)驗(yàn);

【結(jié)果判定】
    菌液接種藥敏培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)4周后,
 (1)觀察培養(yǎng)結(jié)果:
 ① 無菌落生長:對藥物敏感 —
 ② 少于50個(gè)菌落:實(shí)際菌落數(shù);
 ③ 50~100菌落: 1+
 ④ 100~200個(gè)菌落: 2+
 ⑤ 大部分融合
    (200~500個(gè)菌落) 3+
  ⑥ 融合(大于500個(gè)菌落) 4+
    (2)計(jì)算耐藥百分比:
   

  如果耐藥百分比大于1%者報(bào)告耐藥;則認(rèn)為受試菌對該抗結(jié)核藥耐藥;
提示:
    若高稀釋度菌液(10-4mg/mL)在對照培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)少于20個(gè)菌落,則應(yīng)從對照管傳代培養(yǎng),重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
【注意事項(xiàng)】
 1、生物安全方面注意事項(xiàng):
 ① 結(jié)核分枝桿菌操作要在無菌室中進(jìn)行;
 ② 操作人員需進(jìn)行特殊的培訓(xùn),操作時(shí),注意自身安全,防止實(shí)驗(yàn)操作過程中,結(jié)核菌感染;
 ③ 使用后的帶有結(jié)核菌的器材,隨時(shí)收集,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,滅菌處理;
 ④接種操作,嚴(yán)格按照無菌操作;
 2、產(chǎn)品使用方面注意事項(xiàng)
 ① 本產(chǎn)品僅用于結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)鑒定用,
 ② 本品在的保存方法下保存;
 ③ 超過有效期的產(chǎn)品禁止使用;
     產(chǎn)品如果有污染,禁止使用;
 ④ 在本品為無菌產(chǎn)品,在無菌環(huán)境下,開封后即時(shí)使用;
 3、廢棄物處理:
 ① 菌體接觸過的器材或廢棄液體,均需121℃,高壓滅菌20min后,方可丟棄;
 ② 實(shí)驗(yàn)操作后,操作臺用3%苯酚或其他可靠消毒液擦拭后,再用紫外燈照射30min;
【貯存方法·有效期】
    2~10℃保存,有效期4個(gè)月
【包裝規(guī)格】 
    24支×1盒
    每盒包裝兩套藥敏培養(yǎng)基,每套有兩組,共24支。每套包括:

 

含藥物種類及濃度

*組

第二組

INH(0.2ug/mL)

1支

1支

RFP(40ug/mL)

1支

1支

EMB(2ug/mL)

1支

1支

SM(4ug/mL)

1支

1支

空白對照

2支

2支

 

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