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北京西美杰科技有限公司
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更新時(shí)間：2025-01-10 10:33:35瀏覽次數(shù)：72
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Fabsorbent™ F1P HF親和層析填料
近年來(lái)，抗體和抗體片段在生物大分子治療和診斷領(lǐng)域備受關(guān)注，很多抗體類(lèi)藥物已經(jīng)步入商業(yè)化生產(chǎn)階段。相較于完整的抗體，抗體片段分子量低，組織滲透性好，少有復(fù)雜的糖基化結(jié)構(gòu)，可以使用多種原核或真核細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)進(jìn)行表達(dá)，已成為很多生物技術(shù)公司的研究熱點(diǎn)。與完整的抗體不同，很多抗體片段分子結(jié)構(gòu)中沒(méi)有Fc端，無(wú)法用傳統(tǒng)的Protein A親和層析填料進(jìn)行捕獲，而Protein L親和層析填料，由于可以結(jié)合抗體輕鏈的可變區(qū)域，為抗體片段的捕獲提供了可靠的技術(shù)手段。但市面上常見(jiàn)的Protein L親和層析填料穩(wěn)定性普遍較低，填料無(wú)法耐受高濃度堿液的清潔，配基脫落嚴(yán)重，且價(jià)格昂貴，給純化工藝帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。
FabsorbentTM F1P HF是Astrea Bioseparations公司近年來(lái)推出的親和層析填料，填料基架是粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖，基架上修飾有化學(xué)合成的小分子配基，可以高效捕獲各種抗體片段分子。相較于Protein L親和層析填料，FabsorbentTM F1P HF的結(jié)合范圍更廣泛，填料可以耐受高達(dá)1M NaOH的清潔，其主要優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)歸納如下：
結(jié)合范圍廣，既可以結(jié)合kappa型輕鏈，也可以結(jié)合lambda型輕鏈，對(duì)一些非人源性的抗體（如鼠源性、牛源性、羊源性等）也有一定的結(jié)合能力，可廣泛地用于F(ab’)2, Fab, scFv, VL, IgG的捕獲。
小分子化學(xué)合成配基，無(wú)動(dòng)物源性，穩(wěn)定性好，安全性高。
填料可以耐受0.5-1M NaOH的清潔和消毒，清潔效果好，壽命長(zhǎng)。
應(yīng)用案例1：FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2抗體片段
在該測(cè)試案例中，研究人員使用胃蛋白酶將完整的IgG水解為Fc和F(ab’)2片段，并上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示：
層析柱： | CV=10mL |
層析填料： | FabsorbentTM F1P HF |
流速： | 250cm/h |
平衡液： | 25mM Tris-HCl, pH 8.0 |
洗脫液： | 50mM sodium citrate, pH 3.0 |
清潔： | 0.5M NaOH |
由圖1的層析圖譜和圖2的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以高效捕獲料液中的F(ab’)2片段，經(jīng)洗脫后，得到高純度的F(ab’)2分子，層析前添加的胃蛋白酶可被有效去除。
圖1：FabsorbentTM F1P HF捕獲F(ab’)2的層析圖譜
圖2：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是IgG標(biāo)準(zhǔn)品；Lane 3是胃蛋白酶水解后料液；Lane 4是流穿和淋洗液；Lane 5是洗脫液。）
應(yīng)用案例2：FabsorbentTM F1P HF捕獲CHO表達(dá)的Fab抗體片段
在該應(yīng)用案例中，研究人員使用CHO細(xì)胞表達(dá)Fab抗體片段，細(xì)胞收獲液經(jīng)澄清后，上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示：
層析柱： | 10mm×5cm，CV=4mL |
層析填料： | FabsorbentTM F1P HF |
流速： | 300cm/h，上樣流速50cm/h |
平衡液： | 50mM sodium phosphate, pH 8.0 |
上樣： | 澄清后的CHO細(xì)胞收獲液（含F(xiàn)ab），pH 8.0 |
洗脫液（測(cè)試1）： | 50mM sodium citrate, pH 3.0 |
洗脫液（測(cè)試2）： | 50mM sodium acetate, pH 4.0 |
淋洗液（測(cè)試3）： | 50mM glycine-NaOH, pH 9.0 |
洗脫液（測(cè)試3）： | 50mM sodium acetate, pH 4.0 |
清潔： | 0.5M NaOH |
測(cè)試還研究了不同的洗脫工藝條件，測(cè)試1采用了pH 3.0的等度洗脫方式，測(cè)試2采用了pH 4.0的等度洗脫方式，測(cè)試3先采用pH 9.0的甘氨酸緩沖液進(jìn)行上樣后的淋洗，隨后用pH 4.0的醋酸鹽緩沖液進(jìn)行等度洗脫。
由圖4的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以有效捕獲細(xì)胞收獲液中的Fab抗體片段。三種洗脫方式均可以確保大于90%的目標(biāo)Fab純度，且回收率高。其中，在測(cè)試2的洗脫條件下，Fab純度和回收率最高。在測(cè)試3的條件下，洗脫前使用pH 9.0的甘氨酸緩沖液淋洗能去除少量非特異性結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。
圖3：FabsorbentTM F1P HF捕獲Fab的層析圖譜（測(cè)試2）
圖4：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是純化后的Fab對(duì)照品；Lane 3澄清后的CHO細(xì)胞收獲液；Lane 4是測(cè)試1的流穿液；Lane 5是測(cè)試1 的洗脫液；Lane 6是測(cè)試2的流穿液；Lane 7是測(cè)試2的洗脫液；Lane 8是測(cè)試2的再生液（citrate, pH 3.0）；Lane 9是測(cè)試3的流穿液；Lane 10是測(cè)試3的淋洗液；Lane 11是測(cè)試3的洗脫液。）
應(yīng)用案例3： FabsorbentTM F1P HF捕獲E.coli表達(dá)的VL抗體片段
在該應(yīng)用案例中，研究人員使用E.coli表達(dá)VL抗體片段，經(jīng)細(xì)胞裂解和澄清后，直接上樣到FabsorbentTM F1P HF層析柱中，工藝參數(shù)如下表所示：
層析柱： | CV=1mL |
層析填料： | FabsorbentTM F1P HF |
流速： | 保留時(shí)間=3min |
平衡液： | 25mM Tris-HCl, pH 9.0 |
洗脫液： | 50mM sodium citrate, pH 3.0 |
清潔： | 0.5M NaOH |
由圖5的層析圖譜和圖6的SDS-PAGE電泳圖譜可以看出，FabsorbentTM F1P HF可以有效捕獲復(fù)雜料液中的VL抗體片段，大量雜質(zhì)蛋白在上樣和淋洗過(guò)程中被去除，經(jīng)洗脫后，可以得到高純度的目標(biāo)分子VL。
圖5：FabsorbentTM F1P HF捕獲VL的層析圖譜
圖6：SDS-PAGE電泳圖譜（Lane 1是molecular weight marker；Lane 2是澄清后的E.coli裂解液；Lane 3是流穿液；Lane 4是淋洗液；Lane 5是洗脫液；Lane 6是清潔液。）
Fabsorbent™ F1P HF親和層析填料
FabsorbentTM F1P HF親和層析填料的技術(shù)參數(shù)
配基： | 化學(xué)合成的三嗪類(lèi)配基 |
基架： | 粒徑均一的高交聯(lián)瓊脂糖（PuraBead® 6HF） |
平均粒徑： | 90±10µm |
結(jié)合載量： | Human Fab: 20mg/ml adsorbent Human IgG: ≥40mg/ml adsorbent |
操作流速： | up to 500cm/h |
pH穩(wěn)定性： | 3-13（三個(gè)月以上的長(zhǎng)期測(cè)試數(shù)據(jù)） |
清潔/消毒： | 0.5-1M NaOH, 25℃ |
保存： | 20%乙醇，2-30℃ |
FabsorbentTM F1P HF親和層析填料產(chǎn)品信息
散裝填料
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
3904-00025 | FabsorbentTM F1P HF | 25 mL |
3904-00100 | FabsorbentTM F1P HF | 100 mL |
3904-00500 | FabsorbentTM F1P HF | 500 mL |
3904-01000 | FabsorbentTM F1P HF | 1 L |
預(yù)裝柱
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
6632 | FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 1 ml | 4 x 1 ml預(yù)裝柱 |
6633 | FabsorbentTM F1P HF Column Kit, 4 x 5 ml | 4 x 5 ml預(yù)裝柱 |
2233 | FabsorbentTM F1P HF PuraPlate | 96孔板 |
參考資料：
S. Kittler et al., Protein L-more than just an affinity ligand, 2021
Brochure: Purify and capture of antibody fragments with a new synthetic ligand affinity adsorbent FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations
Technical Note: Fab and F(ab’)2 fragment purification from CHO cell culture supernatant using Fabsorbent™ F1P HF, Astrea Bioseparations
Technical User Guide: FabsorbentTM F1P HF, Astrea Bioseparations
Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué)，擁有超過(guò)30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，是層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過(guò)21個(gè)生產(chǎn)工藝通過(guò)了FDA和EMA的批準(zhǔn)。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地，專(zhuān)注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù)，解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過(guò)程，符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。
西美杰是Astrea Bioseparations中國(guó)區(qū)代理，為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。北京西美杰是Astrea Bioseparations 授權(quán)的中國(guó)區(qū)代理，為各大科研院所，研究機(jī)構(gòu)、企業(yè)等客戶提供高品質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)，也收到廣大客戶的好評(píng)。北京西美杰是Astrea Bioseparations 代理，Astrea Bioseparations 中國(guó)代理，Astrea Bioseparations 北京代理，Astrea Bioseparations 總代理，Astrea Bioseparations 上海代理，Astrea Bioseparations 全國(guó)代理，Astrea Bioseparations 西北代理，Astrea Bioseparations 西南代理，Astrea Bioseparations 東北代理，Astrea Bioseparations 華北代理，Astrea Bioseparations 華南代理，Astrea Bioseparations 華中代理。
