一說(shuō)起支原體，估計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)的人員就開始手心冒汗了。細(xì)胞培養(yǎng)中的急性污染很容易察覺，而支原體則能殺細(xì)胞于無(wú)形中。除了非常有經(jīng)驗(yàn)的老手，很多實(shí)驗(yàn)人員都察覺不到支原體的污染，據(jù)統(tǒng)計(jì)，超過(guò)25%的細(xì)胞系中感染了支原體，而研究者大多并不知曉。早期，血清可能是zui主要的污染源；之后，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的儀器、培養(yǎng)基或其他試劑慢慢蔓延開來(lái)，細(xì)胞無(wú)不中招。怎樣才能*討厭的支原體污染呢？讓我們先來(lái)認(rèn)識(shí)這個(gè)小東西。

狡猾的支原體

支原體是*一種沒有細(xì)胞壁的原核生物，大多呈不規(guī)則球狀或絲狀。由于它的直徑小，而且形狀靈活，所以能逃過(guò)實(shí)驗(yàn)室常用的濾膜。

檢測(cè)、檢測(cè)、再檢測(cè)

對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行常規(guī)的支原體檢測(cè)非常重要。盡管各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)頻率不同，從幾個(gè)星期到幾個(gè)月不等，不過(guò)這主要取決于你們實(shí)驗(yàn)室有多少人接觸細(xì)胞，以及你們引進(jìn)新細(xì)胞的頻率。比如美國(guó)國(guó)立細(xì)胞培養(yǎng)中心，它經(jīng)常從其他實(shí)驗(yàn)室獲得細(xì)胞培養(yǎng)物，就會(huì)對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，并將它們隔離，直至zui后證明沒有支原體污染。支原體清除試劑，每?jī)扇齻€(gè)月進(jìn)行一次定期檢測(cè)是必要的。如果有新細(xì)胞進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，或準(zhǔn)備將細(xì)胞進(jìn)行液氮保存，都應(yīng)該進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)然，如果細(xì)胞不大對(duì)勁，應(yīng)立馬檢測(cè)。

支原體檢測(cè)：

檢測(cè)頻率是一方面，選擇合適的檢測(cè)方法也很重要。到底是PCR、生化分析，ELISA還是免疫熒光呢？PCR應(yīng)該是檢測(cè)支原體的理想方法，他綜合了幾個(gè)優(yōu)勢(shì)，靈敏、特異、快速、廉價(jià)等。細(xì)胞培養(yǎng)上清可以直接用來(lái)檢測(cè)，非常方便。Applichem公司提供的高靈敏度PCR Mycoplasma Test Kit（A3744）,該試劑盒引物源于支原體基因的保守序列，而且即用型的PCRmix使您的使用更加方便，同時(shí)更是提供了陽(yáng)性對(duì)照。當(dāng)然為了避免假陽(yáng)性和假陰性，試驗(yàn)中必須設(shè)立多種對(duì)照：除了陽(yáng)性對(duì)照外，還有陰性對(duì)照和內(nèi)對(duì)照。

用Hoechst33258染料檢測(cè)支原體是很多教科書上推薦的方法。由于支原體含有DNA，能與Hoechest33258染料結(jié)合，在500倍數(shù)放大情況下，表現(xiàn)為細(xì)胞顆粒或纖毛染色。但操作過(guò)程較為繁瑣，且需要一定的經(jīng)驗(yàn)辨別支原體，新手可能大不容易掌握。

支原體污染和清除：

如果很不幸，你的細(xì)胞已經(jīng)感染了支原體，怎么辦？大部分人的想法可能都是把感染的細(xì)胞扔掉，重新開始。一旦感染了支原體，細(xì)胞復(fù)原的機(jī)會(huì)很小。所以在液氮中多儲(chǔ)存一些備份還是比較明智的選擇：支原體清除試劑。

如果你的細(xì)胞非常稀有且珍貴，那只能去奮力搶救了。拿什么拯救你，我的細(xì)胞？由于支原體沒有細(xì)胞壁，且代謝慢，故大部分傳統(tǒng)的抗生素都不奏效。但是北京西美杰公司提供了一些Applichem的。Myco-3（A5240），Myco-1（A5222）Myco-2（A5233）。這三類是有多種支原體敏感的抗生素研制而成，無(wú)細(xì)胞毒性。100倍濃縮液直接加入培養(yǎng)基，使用方便。具體的使用方法如下：

 Myco-3加入培養(yǎng)基中，每2-3天換液一次，連續(xù)處理14天，可有效清除絕大多數(shù)支原體污染。

頑固支原體需Myco-1和Myco-2聯(lián)合使用：Myco-1處理4天后換Myco-2處理3天，如此重復(fù)2-3次。

支原體預(yù)防：

雖然說(shuō)支原體可以鏟除，但這種勞心勞力的事情估計(jì)沒有人愿意做，那么平時(shí)的預(yù)防更重要。北京西美杰公司還提供了幾樣好東西，能預(yù)防支原體的污染。具體介紹如下Incubator-Clean（A5230）

用于CO2培養(yǎng)箱的消毒，噴一噴，*預(yù)防支原體、細(xì)菌和病毒等的污染。

Incuwarter-Clean（A5219）

用于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)保持空氣濕度的水源消毒，100*即用型濃縮液。

Aquabator-Clean（A5225）

用于水浴的消毒，有效防止各類污染。

需要特別提及的是，液氮罐中也可能有支原體。支原體能耐受液氮的低溫，雖然不會(huì)增殖，但會(huì)污染你的細(xì)胞。因此，細(xì)胞凍存管還是不要放在液氮內(nèi)，以免液氮滲進(jìn)入細(xì)胞，而是儲(chǔ)藏在液氮的氣相中。

不過(guò)，預(yù)防支原體污染的方法，還是良好的細(xì)胞培養(yǎng)技巧和正確的態(tài)度。雖然這些都是老生常談，但一旦熟悉了細(xì)胞培養(yǎng)，就很容易麻痹大意，時(shí)常敲敲警鐘還是相當(dāng)必要的。下面我將北京西美杰公司提供的有關(guān)支原體預(yù)防，檢測(cè)和清除的產(chǎn)品做一個(gè)總結(jié)：

支原體預(yù)防：

支原體檢測(cè)：

支原體清除：

   除了支原體污染清除，支原體預(yù)防，檢測(cè)和清除方面的試劑外，北京西美杰公司還提供了Applichem細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)方面的其他試劑，包括各種細(xì)胞培養(yǎng)基，氨基酸，抗生素以及糖和鹽類。同時(shí)也包含了常用的其他生化試劑，如有需要可隨時(shí)我們的：.