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1. 存放血清的方法
血清一般保存在-20℃以下。若存放于4℃時(shí),請勿超過半個(gè)月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2.如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損
建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理
血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍地原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖素蛋白(形成凝血地蛋白之一)在血清解凍后,也會(huì)存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議你以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。
4.如何避免沉淀物的生產(chǎn)
我們建議您在使用血清的時(shí)候,注意下列的操作:
⑴ 解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
⑵ 解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
⑶ 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
⑷ 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
⑸ 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高、時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
5.為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。
6.有必要做熱滅活嗎
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的 。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓幕钚?,而造成?xì)胞生長速度的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此以來,不但節(jié)省你寶貴的時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。
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