羅丹明123染色線粒體膜

羅丹明123染色檢測(cè)線粒體膜電位
外觀：紅棕色粉末

化學(xué)名：Rh123 羅丹明123

別名： Rhodamine 123; Rh123

分子式：C21H17CLN2O3

分子量：380.82

配制：羅丹明123粉劑用甲醇配成1mg/mlde 儲(chǔ)備液，染色時(shí)用DPBS緩沖液將其稀釋為所需濃度

保存：冰箱-20度避光

一、檢測(cè)原理：

羅丹明123（Rhodamine 123）是一種可透過細(xì)胞膜的陽離子熒光染料，是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細(xì)胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進(jìn)入線粒體基質(zhì),熒光強(qiáng)度減弱或消失。而在凋亡發(fā)生時(shí)，線粒體膜完整性破壞，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開放，引起線粒體跨膜電位（ΔΨm） 的崩潰, Rh123 重新釋放出線粒體, 從而發(fā)出強(qiáng)黃綠色熒光，可用熒光顯微鏡、熒光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，通過熒光信號(hào)的強(qiáng)弱來檢測(cè)線粒體膜電位的變化和凋亡的發(fā)生，可用于培養(yǎng)的細(xì)胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測(cè)。

二、 使用方法：

1．細(xì)胞染色及分析

（1）培養(yǎng)細(xì)胞1×106/mL重懸于培養(yǎng)基中；

（2）加入羅丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐細(xì)胞種類不同而濃度不同，一般3～10 μg/mL）；

（3）37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育1～30 min（根椐細(xì)胞種類不同而不同，一般10 min）；

（4）離心以培養(yǎng)基洗細(xì)胞兩次；

2． 組織提取的線粒體染色及分析

（1）按常規(guī)方法提取的線粒體，用適量的1×Assays Buffer（將5×Assays Buffer 用水稀釋5倍）重懸；

（2）常規(guī)方法進(jìn)行蛋白含量測(cè)定后，用1×Assays Buffer調(diào)配成3mg/mL的線粒體溶液；

（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL線粒體溶液；

（4）加入適量待測(cè)化合物（同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組），250C保溫min；

（5）加入羅丹明123染液10 μL；

（6）熒光光度計(jì)檢測(cè)：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下測(cè)定，激發(fā)波長(zhǎng)488～505nm，發(fā)射波長(zhǎng)530nm，連續(xù)記錄從0 min～30 min內(nèi)熒光強(qiáng)度的變化。

三、注意事項(xiàng)

1、操作時(shí)需戴手套

2、羅丹明123為通透性染料，可以自由進(jìn)入細(xì)胞

3、孵育時(shí)，必須避免光照

4、使用時(shí)，避免污染母液

5、染色完成后，即刻進(jìn)行熒光檢測(cè)分析