臺盼藍(lán)之細(xì)胞染色

臺盼藍(lán)（Trypan Blue，也稱Direct blue 14）：一種死細(xì)胞染色用色素

化學(xué)名：
3,3'-{[3,3'-Dimethyl（1,1'-biphenyl）-4,4'-diyl]bis（azo）}bis（5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid）, tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-（1,1’-二苯基）-4,4’-二基]雙（偶氮）}-雙（5-氨基-4-羥基-2,7-萘二磺酸），四鈉鹽

分子式：C34H24N6Na4O14S4
分子量：960.81
CAS Number： 72-57-1
外觀：黑褐色結(jié)晶粉末
摩爾吸光度：>69,000（在606nm附近）

染色原理：
細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA 結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。嚴(yán)格來說，臺盼藍(lán)染色檢測的是細(xì)胞膜的完整性，通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。這被稱為染料排除測試（dye exclusion），Erythrosin B（紅色）、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍(lán)染色的細(xì)胞，并可使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。

溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深藍(lán)色。
臺盼藍(lán)主要用來鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞分離后的存活情況，用0.4%臺盼藍(lán)直接染色5-10分鐘，在顯微鏡下觀察即可。

應(yīng)用于細(xì)胞凋亡：
如果細(xì)胞膜不完整、破裂，臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán)，即為壞死。如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺盼藍(lán)染色，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。盡管在凋亡的早期到中期檢測是很困難的，此方法對反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。

儲存條件：常溫保存

注意事項(xiàng)：
1. 臺盼藍(lán)對人體有毒
2. 臺盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí)，時(shí)間不宜過長。否則，部分活細(xì)胞也會著色，會干擾計(jì)數(shù)。
3. 臺盼藍(lán)染色法對于懸浮細(xì)胞來說，還比較方便，對貼壁細(xì)胞來說，較為繁瑣。因?yàn)橐?，有時(shí)，96孔板不一定能消化干凈。而且，該法是測定細(xì)胞濃度的方法，與細(xì)胞懸液的體積有關(guān)，加入的胰蛋白酶或1640要計(jì)入終體積?？梢哉f，該法相對準(zhǔn)確，可能有一些人為因素的干擾。