各種動物外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書

【產(chǎn)品規(guī)格】200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。根據(jù)樣本量大小，分以下兩種情況：

 情況 A：血液樣本量小于 5ml 時，實(shí)驗(yàn)方法如下：

 1. 取一支 15ml 離心管，小心加入 5ml 試劑 A。

 2. 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-550g ，離心 20-30min（注：如改變血液樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果。）

3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細(xì)胞層，上層細(xì)胞為單個核細(xì)胞層，下層細(xì)胞為中性粒細(xì)胞層。

 4. 用吸管小心吸取分離液中的中性粒細(xì)胞層，如有紅細(xì)胞混雜則加入適量紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號：NH4CL2009）將紅細(xì)胞裂解（具體方法見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”）即得目的細(xì)胞。

 5. 將獲得的細(xì)胞層移至另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細(xì)胞。

 6. 250g，離心 10min。

 7. 棄上清。

 8. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

 9. 250g，離心 10min。

 10. 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

 情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時，實(shí)驗(yàn)方法如下：

 1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入試劑 A,試劑總量與稀釋后的樣本量相等。

 2. 將血液樣本小心加于分離液之液面上，450-650g（zui大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二）。

 3. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。

 【注意事項(xiàng)】

 1. 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 2. 本實(shí)驗(yàn)不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

 3. 分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。

 4. 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。

 5. 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請TBD以尋求幫助。

 【儲存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

 【參考值（參考范圍）】

 本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。

 下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

1. 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2. 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

3. 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

 1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

 2. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 3. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到*分離效果，

 離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。