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中級會(huì)員 | 第16年

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噬菌體制備的一些基本實(shí)驗(yàn)方案

時(shí)間：2013-12-24閱讀：1034
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    大部分噬菌體展示方案都涉及這樣一個(gè)基本步驟：從被感染的細(xì)菌中制備噬菌體或噬菌粒顆粒的儲液（增殖），并滴定這些儲液以測定有感染力的顆粒的濃度。對于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），對于噬菌體載體（以及輔助噬菌體），要通過計(jì)數(shù)宿主菌菌苔上的噬菌體斑來測定這些可變顆粒的濃度。為了確保能得到一個(gè)能繁殖的噬菌體的純培養(yǎng)物，任何時(shí)候增殖噬菌體載體或輔助噬菌體，按照這個(gè)步驟來進(jìn)行噬菌斑的分離都是可取的。
對于噬菌粒載體，噬菌粒的滴定涉及對細(xì)菌的感染，以及對得到的抗生素耐受性的克隆的計(jì)數(shù)。
    測定噬菌體或噬菌粒制備產(chǎn)物感染力的一個(gè)簡便的替代方案是通過吸光度評估濃度。消光系數(shù)（extinctioncoefficient）取決于噬菌體顆粒的大小，而噬菌體顆粒的大小又取決于基因組的大小。一般而言，對于一個(gè)輔助噬菌體如VCSMl3，lOD270=1．1X1013個(gè)顆粒／m1。但基于吸光度的計(jì)算可能對能繁殖的、有感染力的顆粒的濃度評估過高。

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