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緩沖葡萄糖蛋白胨水：

用途：

用于MR和VP試驗(yàn)（GB/T4789.38－2008，SN0169-92和《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版）。

原理：

多胨提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；葡萄糖為可發(fā)酵的糖類；磷酸氫二鉀是緩沖劑；氯化鈉維持均衡的滲透壓。

甲基紅（MR）試驗(yàn)：腸桿菌科的細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中，分解葡萄糖，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸。大腸桿菌分解丙酮酸，次生的酸類較多，pH為4.5或更低，甲基紅呈現(xiàn)紅色（陽(yáng)性）。在產(chǎn)氣桿菌的培養(yǎng)液中一部分丙酮酸變?yōu)橹行缘囊阴＜谆状迹傻乃犷愝^少，pH在5.4以上，甲基紅呈現(xiàn)桔黃色（陰性）。

乙酰甲基甲醇生成試驗(yàn)（V—P試驗(yàn)）：細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖生成丙酮酸，某些細(xì)菌可使丙酮酸脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性溶液中，乙酰甲基甲醇可在空氣中氧化成二乙酰（丁二酮）。二乙酰再與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。試驗(yàn)中加入α—萘酚是作催化劑，使反應(yīng)的顏色加深，提高反應(yīng)的敏感性。

配方（每升）：

磷酸氫二鉀	5g
多胨	7g
葡萄糖	5g

zui終pH 7.0±0.2

使用方法：

1、稱取本品17g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝試管每管1mL，121℃高壓滅菌15min。

2、甲基紅（MR）試驗(yàn)

A：取少量待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2—5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22—25℃培養(yǎng)。

B：48h取出部分培養(yǎng)液，滴加（029040）甲基紅試劑三滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性。

3、 V—P試驗(yàn)

A：取待檢菌的新鮮純培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2—4d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22—25℃培養(yǎng)。

B：48h后取出部分培養(yǎng)液，按順序加入1/2培養(yǎng)液體積的（029050）VP試劑甲液和1/5體積的乙液充分搖勻試管，觀察結(jié)果。陽(yáng)性者應(yīng)立刻或數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h后再進(jìn)行觀察。

質(zhì)量控制：

本品接種后于36±1℃培養(yǎng)48h，滴加試劑，生化特征如下：

菌名	菌號(hào)	生長(zhǎng)狀況	MR試驗(yàn)培養(yǎng)特征	VP試驗(yàn)培養(yǎng)特征
大腸埃希氏菌	ATCC25922	良好	培養(yǎng)基變紅色	無(wú)紅色
產(chǎn)氣腸桿菌	CMCC（B）45301	良好	培養(yǎng)基顏色不變	10—20min內(nèi)顯紅色

參考文獻(xiàn)：

GB/T4789.4－2003 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)

GB/T4789.28－2003中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn) 染色法，培養(yǎng)基和試劑

SN0169－92 中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群，糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法

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