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免疫熒光實驗中細(xì)胞爬片如何使用

時間：2023/12/25閱讀：742
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首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時烤干備用。

爬片可以在培養(yǎng)皿 六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費（培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用）二來覺得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時記得消兩把鑷子

具體操作是：用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液（注意：這一點很重要，關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量）

取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基（以使玻片與培養(yǎng)皿緊密接觸），將玻片小心放入擺放其中，然后將單細(xì)胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。最后蓋上培養(yǎng)皿置于37度5％CO2的暖箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況，24小時或更長時間適時取出爬片。

爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4％多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。

將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠干了之后才能做后續(xù)實驗，要不然玻片會掉下來的，就又是前功盡棄了 做好的細(xì)胞爬片可以放在－20保存?zhèn)溆?，具體能保存多長時間不太清楚，當(dāng)然盡量早用。


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