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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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蛋白酶K的作用及保存方法

時(shí)間：2024/1/2閱讀：761
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作用：
蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增強(qiáng)探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號(hào)。
但蛋白酶K濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí)，都會(huì)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。
EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。

保存方法：
保存在-20℃的冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12個(gè)月。
孵育溫度為55-65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)，理想孵育時(shí)間為2小時(shí)

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