抗子宮內(nèi)膜抗體（endomethal antibody，EMAb）檢測

抗子宮內(nèi)膜抗體（endomethal antibody，EMAb）檢測

    子宮內(nèi)膜抗體（endomethal antibody，EMAb）是子宮內(nèi)膜異位病患者受到異位內(nèi)膜的刺激，或經(jīng)血逆流等因素導致免疫應答紊亂產(chǎn)生的一種自身抗體，并與子宮內(nèi)膜中靶抗原結(jié)合，在補體參與下，引起子宮內(nèi)膜免疫病理損傷，影響孕卵著床，也容易發(fā)生早期流產(chǎn)。目前檢測EMAb的方法有間接免疫熒光法（1FT）、雙向免疫擴散法（1D）、間接血凝法（PHA）及ELISA法等。IFF法需刮取子宮內(nèi)膜制備抗原片，并需一定設備，不易普及開展，ID及PHA法的靈敏度與特異性均不高，現(xiàn)介紹間接ELISA法。

    1．試劑  ①子宮內(nèi)膜抗原：從子宮切除術取得的子宮內(nèi)剖取內(nèi)膜，用無菌生理鹽水洗去血塊，剪成lmm3小塊，懸入0．01mol／L，pH7．4PBS中（內(nèi)含青霉素1 000U／mL，慶大霉素50ug／mL，鏈霉素100ug／mL，10％小牛血清）與0．25％膠原酶（collagenase Type 1）共育，通過250um,40um不銹鋼分樣篩，洗去膠原酶，收集篩網(wǎng)上子宮內(nèi)膜腺體，經(jīng)玻璃勻漿器勻漿后，1 000r／min離心20rain，棄沉淀，上清通過抗人全血清-Sepharose 4B柱，收集流洗液。濃縮后，雙向免疫擴散與抗人全血清、抗人纖維蛋白原抗體之間應無沉淀線，作為包被抗原；②HRP標記的SPA結(jié)合物，用方陣法滴定zui適工作濃度。

    2．操作步驟  在聚苯乙烯反應板每孔加100uL子宮內(nèi)膜抗原（1：100），4T：，包被過夜，常法洗滌。用含15％小牛血清的pH7．40．01mol／LPBS封閉，45℃溫育1h，洗滌后加1：2稀釋的待測血清，45℃1h后洗滌，加底物（OPD-H₂0₂）溶液，于37％避光反應5～15min，加H₂S0₄終止反應后，測492nm波長吸光度（A）值。以A值的X十2S為正常上限，大于或等于上限者為陽性。

    3．臨床意義  正常婦女由于經(jīng)血逆流人腹腔對免疫系統(tǒng)的刺激，血清中有低水平EMAb存在（陽性率3％—7％），以中年婦女的陽性率zui高，閉經(jīng)后EMAb水平下降，漸趨消失。不孕、流產(chǎn)及子宮內(nèi)膜異位癥患者陽性率可達37％～50％。EMAb、抗精子抗體和弓形體感染是引起人類不孕、流產(chǎn)的3個主要因素，聯(lián)合檢測則更可以提高診斷的準確性。

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