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抗精子抗體(antispermatozoa antibody,ASA)檢測(cè)

時(shí)間:2009/8/8閱讀:431
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抗精子抗體(antispermatozoa antibody,ASA)檢測(cè)

 

    男性體內(nèi)的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當(dāng)此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時(shí),精子或其可溶性抗原逸出,可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生自身抗精子抗體(antispermatozoa antibody,ASA),從而抑制精子產(chǎn)生,造成男性不育。女性生殖道具有酶系統(tǒng),能降解進(jìn)入的精子抗原,使其不能達(dá)免疫系統(tǒng)。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產(chǎn)生。大約10%~30%原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。

 

    測(cè)定ASA的方法很多,目前常用的有熒光抗體法,淺盤微量凝集法,伊紅Y染色法,試管或玻片凝集法,固相酶染色法,免疫珠法,免疫洗選法(panningELISA法等。這些方法各有利弊,都不能*臨床快速診斷的要求。莊南等(1991)ELISA反應(yīng)系統(tǒng)中,加入適量的PEG,可使每步反應(yīng)時(shí)間在10min內(nèi)完成,同時(shí)用DW-T快速?zèng)_洗代替常規(guī)的PBS-T洗滌方法,從而能在40rain內(nèi)完成檢驗(yàn)。且該法有較高特異性和精密度,適用于常規(guī)工作。現(xiàn)介紹快速ELISA法檢測(cè)抗精子抗體。

 

    1.試劑  人精子膜抗原:取20份正常生育男性的精液,液化后,用PBS5次,沉淀的精子混懸于含05NP-40(FLUKA)Tris-HCl緩沖液中,41h,17 000Xg離心30min,取上清液測(cè)定蛋白量,即為精子膜抗原;HRP標(biāo)記的羊抗人丁球蛋白;4%和8PEG-PBST緩沖液:001molL,pH74PB加入NaCl達(dá)085%,Tween-20005%及PEG60004%或8%。

 

    2.操作步驟  將精子膜抗原用包被液按1100稀釋,包被反應(yīng)板微孔,每孔100uL,4過(guò)夜,用含005Tween-20的蒸餾水(DW-T)3次,每孔加待測(cè)血清50uL,同時(shí)設(shè)性、陽(yáng)性和空白對(duì)照孔,4310rainDW-T3次后,加zui適工作濃度的HBP標(biāo)記的抗人γ球蛋白用含0%小牛血清的4PEG-PBST11 000稀釋,每孔100uL,4310min;DW—T3次,加底物(OPD-H202溶液,每孔100yL,3710min使呈色,用2molLH2S04 50gL終止反應(yīng),測(cè)492nm波長(zhǎng)吸光度值(A),以PN≥21為陽(yáng)性。

 

  3.臨床意義  ASA的檢出率因采用的檢測(cè)方法不同,結(jié)果也不一致。通常不育者血清中ASA檢出率在10—30%左右。尤其是梗阻性無(wú)精癥病人,ASA陽(yáng)性率可高達(dá)60%。ASA的出現(xiàn)以及滴度升高是造成免疫性不育、不孕的根本原因,因而ASA的檢測(cè)對(duì)不育的臨床治療和預(yù)后的判斷提供了有價(jià)值的指標(biāo)。

 

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