抗心磷脂抗體ACA的檢測(cè)方法

抗心磷脂抗體ACA的檢測(cè)方法

    抗磷脂抗體是一組針對(duì)各種帶負(fù)電荷磷脂的自身抗體，包括抗心磷脂抗體（anticardi-

olipinantibody，ACA）、抗磷脂酰絲氨酸、抗磷脂酰胺醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸抗體等。國(guó)內(nèi)一些單位對(duì)SLE、習(xí)慣性流產(chǎn)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、急慢性白血病、腎臟疾病、消化系統(tǒng)疾病等研究發(fā)現(xiàn)，ACA與這些疾病的凝血系統(tǒng)改變、血栓形成、血小板減少等密切相關(guān)，并與疾病的發(fā)生機(jī)理也有關(guān)聯(lián)。ACA較其他四種負(fù)電荷性磷脂抗體陽(yáng)性率高，且敏感，故ACA檢測(cè)日益受到重視。已建立了RIA和ELISA等方法。國(guó)內(nèi)已有商品化的ELISA法檢測(cè)ACA試劑盒問(wèn)世，可以作為常規(guī)檢查。

    1。試劑  ①純心磷脂：可購(gòu)買商品心磷脂（cardiolipin，CL）；②辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗人IgC．、IgM、IgA。

    2，操作步驟  將純心磷脂用無(wú)水乙醇配成12．5／／g／mL，加入干燥潔凈的聚苯乙烯反應(yīng)板，50~L／孔，置氮?dú)庀率覝卣舭l(fā)干燥。次日以PBS-T洗板3次后，以0．3％明膠封閉，150gL／孔，置37T1 90rmn，洗板3次。加1：1 000稀釋的待測(cè)血清或陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清（稀釋液為0．01mol／L，PBS-T，pH7．4，含4％PEG），lOOgL／孔，置37~C濕盒反應(yīng)2ho洗板5次后，加HRP-羊抗人ISC或Igm、IZA（以含1％BSA的PBS-T-PEG稀釋成1：800）100~L／孔，置37~C濕盒反應(yīng)1h。洗板5次后甩干，加新鮮配制的底物液i00／~L／孔（10ngOPD溶于25mL，0．1mol／L，pH5．0的檸檬酸緩沖液，加3％H20：20／~L），37％反應(yīng)10～15min，待充分顯色后每孔滴加2mol／LU2S04 50gL終止反應(yīng)，測(cè)各孔492nm吸光度（A）。

    3．結(jié)果判定與臨床意義  標(biāo)本及陽(yáng)性、陰性對(duì)照均采用雙孔測(cè)定，取2孔A值的平均值以P／N~>2．1判為陽(yáng)性。

在腦血栓患者中，IsC型ACA陽(yáng)性率zui高并與臨床密切相關(guān)。約70％未經(jīng)治療的ACA陽(yáng)性患者可發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)和宮內(nèi)死胎，尤其是IzM型ACA可作為自發(fā)性流（死）產(chǎn)的前瞻性指標(biāo)。已證實(shí)ACA陽(yáng)性者血小板減少發(fā)生率均明顯高于陰性者，以IgC型抗體多見(jiàn)，并與血小板減少程度有關(guān)。ACA也是SLE常見(jiàn)的自身抗體，在SLE患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）血栓形成與陽(yáng)性ACA顯著相關(guān)?？傊?，ACA可作為抗磷脂抗體綜合征（包括血栓形成、自發(fā)性流產(chǎn)、血小板減少和CNS病變）的診斷指標(biāo)之一。

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