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乙腦病毒IgM檢測試劑盒（酶聯免疫法）

預期用途

乙腦病毒IgM檢測 ELISA試劑盒可用于人血清中抗重組抗原（來源于JEV）的IgM抗體的檢測。這一檢測有助于人是否感染了JEV的診斷。此試劑盒并不用于血液或血液成分的篩查，且該試劑盒尚未針對疫喵誘導的血清轉化研究進行優(yōu)化，因而僅供專業(yè)人士和體外診斷用。

檢測原理

JE檢測MAC-ELISA由一種酶促擴增的“兩步"夾心式免疫測定法組成。在測試中，JE陰性質控，陽性質控和使用樣本稀釋液稀釋的未知樣本首先加入到包被有抗人IgM的微孔板上進行溫育，洗板之后分別與JEV衍生的重組抗原（JERA）和正常細胞抗原（NCA）一起溫育。再次洗板后加入HRP標記的抗乙腦抗體。洗板，加入TMB作為顯色劑，一段時間后加入硫酸以終止底物反應。所形成的顏色深度與樣本中的特異性抗體成正比。當吸光度高于一定值時，JERA和質控品的吸光率可準確地測定JEV抗體是否存在。

試劑盒組成成分
乙腦病毒IgM檢測 ELISA試劑盒包含了足夠用于96孔的試劑。此試劑盒包含的成分有：
JE IgM檢測用的特定材料：

■JEV人IgM檢測用微孔板：包被有抗人IgM抗體的96孔聚苯乙稀微孔板，在2-8℃下儲存?zhèn)溆?，包被了抗人IgM的微孔可用來捕獲人樣品中的IgM抗體。

■IgM樣品稀釋液：25ml ，1瓶，2-8℃下貯存，即用。
注意：如果稀釋液出現沉淀，先旋渦混合再使用。

■JE IgM 陽性質控：1支50μl熱滅活滅活血清。JE IgM陽性質控用于輔助監(jiān)測試劑的完整性。2-8℃下儲存至使用。在使用前短暫地迅速搖勻試劑，以收集瓶底的成分。

■JE陰性質控：1支50μl熱滅活血清，JE陰性質控用于輔助監(jiān)測試劑的完整性，2-8℃下儲存至使用。在使用前短暫地迅速搖勻試劑，以收集瓶底的成分。

注意：若需長時間儲存（＞1周）血清應分裝儲存在-70℃或-20℃。

■JE抗原（JERA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下貯存，即用

■正常細胞抗原（NCA）：1支，3ml即用型的JERA，2-8℃下貯存，即用

■10X的洗滌液：1瓶120ml，在整個過程的洗板步驟中120mL的洗滌液將被使用，在2-8℃下儲存。

■Enwash:1瓶，20ml，Enwash在加酶聯物后的洗板程序之間使用，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?/span>

■用于JE IgM檢測的即用型 HRP酶標物：1瓶, 6ml，內含預稀釋好的HRP黃熱病毒活性單克隆抗體，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?br/>注意該試劑任何時候都應該在避光條件下保存。

■TMB底物液： 1瓶，9ml，在2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?/span>

注意：底物液應時刻存放于試劑盒所提供的避光瓶里。
■ 終止液：1瓶6ml，用來終止酶反應，2-8℃下貯存?zhèn)溆谩?br/>警告：強酸；穿保護手套、面罩和戴安全眼鏡，棄置所有材料均應按照安全條例與規(guī)則進行。

檢測所需材料（試劑盒內未提供）

試劑盒檢測步驟

1.陽性質控，陰性質控應在乙腦重組抗原和正常細胞抗原試驗中做雙孔檢測。未知樣本可以做單孔或雙孔檢測，但乙腦重組抗原和正常細胞抗原試驗中都必須檢測，一個96孔板多可檢測44個樣本，具體可參考本節(jié)末尾的流程圖。

2、標記好試驗所需包被板

3、用所提供的樣品稀釋液將待測血清和質控稀釋至1/100，用小聚苯乙烯軟管完成稀釋。至少使用4ul的血清樣品，陰性、陽性質控。例如4µl的血清加入396µl的樣品稀釋液配制出1/100的稀釋液。

4、用多頭或單頭的移液管將稀釋的樣品，陰性質控，陽性質控各50ul加入相應的微孔中，以下加入44份測試血清的范例

5、 用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是不需要覆蓋的。
注意：這樣是為了保證溫度均勻的分布在每個孔的底部和邊緣。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。
6. 37℃下保濕溫育板條1小時。
注意：不要將微孔板板條的頂部疊起，必須單獨地分層平輔。這對于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤的物質，如濕紙巾等。詳見英文說明書。

7.孵育后，使用自動洗板機用1X 的洗滌緩沖液洗板6次，每孔300ul

8.用多頭的移液器在A-D列加入50ul的乙腦重組抗原，E-H列加入50ul的正常細胞抗原；以下為加入JERA和NCA的應用范例：

9.用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所以板條的底部是沒有覆蓋的。

10.在孵育器中37℃下溫育板條1小時

11.在溫育后，用自動洗板機洗板6次，每次洗板時每孔使用300µl的洗滌液

12.用多頭的移液器每孔加入50µl的HRP標記的酶聯物

13用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所以板條的底部是沒有覆蓋

14.在37℃下避光溫育板條1小時

15.溫育后，使用洗板液，用自動洗板機洗板6次。

16.用頭多的移液器在每孔中加入150µl的Enwash

17.不用封板，在室溫下溫育5分鐘

18.在溫育后，使用1X的洗板液，用自動洗板機洗板6次

19.用多頭的移液管每孔加入75µl的液態(tài)TMB底物液。

20.不用封板，將微孔板在室溫下避光靜置10分鐘。

21.用多頭的移液管在每孔中加入50µl的終止液，不用封板，在室溫下孵育1min。

22.用酶標儀在450nm處讀取OD值， 請確保酶標儀不會減去或標準化任何空白值或孔。

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