染色體步移技術(shù)如何

 
染色體步移技術(shù)（genome walking）是一種關(guān)緊的分子生物科學(xué)研討技術(shù)，運(yùn)用這種技術(shù)可以管用取得與已知序列相鄰的未知序列。

染色體步移技術(shù)主要有以下幾方面的應(yīng)用：

①依據(jù)已知的基因或分子標(biāo)記蟬聯(lián)步移，取得人、動物和植物的關(guān)緊調(diào)節(jié)控制基因，可以用于研討結(jié)構(gòu)基因的表現(xiàn)調(diào)節(jié)控制。如離合克隆開始工作子并對其功能施行研討；

②步查取得新物種中基因的非守舊地區(qū)范圍，因此取得完整的基因序列；

③鑒定T-DNA或轉(zhuǎn)座子的插進(jìn)去位點(diǎn)，鑒定基因槍轉(zhuǎn)基因法等轉(zhuǎn)基因技術(shù)所造成的外源基因的插進(jìn)去位點(diǎn)等；

④用于染色體測序辦公中的窟窿眼兒填補(bǔ)，取得完整的基因組序列；

⑤用于人工染色體PAC、YAC和BAC的斷片搭接。

對于基因組測序已經(jīng)完成的少量物種（如人、小鼠、線蟲、稻子、擬南芥等）來說，可以輕松地從數(shù)值庫中找到某物種已知序列的翼側(cè)序列。不過，對于大部分?jǐn)?shù)有生命的物質(zhì)而言，在不成解他們的基因組序列曾經(jīng)，想要曉得一個(gè)已知地區(qū)范圍兩側(cè)的DNA序列，只能認(rèn)為合適而使用染色體步移技術(shù)。

以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的染色體步移的主要問題是，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱在預(yù)先不成解未知地區(qū)范圍序列信息的事情狀況下，怎么樣預(yù)設(shè)兩個(gè)特別優(yōu)異性引物來擴(kuò)增未知地區(qū)范圍。而傳統(tǒng)的染色體步移辦法，如：逆向PCR法、連署接頭法等，都有操作復(fù)雜、非特別優(yōu)異性擴(kuò)增、連署速率劣等弊病。

TaKaRa新產(chǎn)品之Genome Walking Kit試藥盒是一種依據(jù)已知基因組DNA序列，取得翼側(cè)未知序列的試藥盒。相對于其他傳統(tǒng)辦法，本試藥盒具備、簡單方便、特別優(yōu)異性高、銳敏度高、一次性取得的未知序列較長等*的地方。其主要原理是依據(jù)已知DNA序列，作別預(yù)設(shè)三條同向且退火溫度較高的特別優(yōu)異性引物（SP Primer），與試藥盒中供給的四種通過*特別預(yù)設(shè)的退火溫度較低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4施行熱錯(cuò)誤稱PCR反響。

一般事情狀況下真空干燥箱，那里面至少有一種兼并引物可以與特別優(yōu)異性引物之間利用退火溫度的差別施行熱錯(cuò)誤稱PCR反響，經(jīng)過三次巢式PCR反響即可取得已知序列的翼側(cè)序列。假如一次實(shí)驗(yàn)取得的長度不可以滿意實(shí)驗(yàn)要求時(shí)，還可以依據(jù)步移取得的序列信息，接著施行翼側(cè)序列取得。這個(gè)之外，本試藥盒中還包括Control DNA及Control Primer，可以便捷施行Control實(shí)驗(yàn)。