目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1635-100T/96S漆酶活性檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號 | BC1635 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 測定意義:漆酶(Laccase)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍(lán)氧化酶家族,廣泛 |
漆酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC1635
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
工作液的配制:一瓶試劑二用10 mL試劑一溶解?,F(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明:
漆酶(CE1.10.3.2)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍(lán)氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一種環(huán)保型酶,其催化性質(zhì)在生物檢測中有廣泛的應(yīng)用。
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS,測定ABTS自由基的增加速率,可計(jì)算得漆酶活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,水浴鍋
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3、培養(yǎng)液:直接檢測。
二、測定步驟
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至420nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
水浴鍋溫度調(diào)至45℃。
操作表:在微量玻璃比色皿/96孔板中分別加入下列試劑:
試劑名稱 | 測定管 | 空白管 |
樣本(μL) | 30 | - |
蒸餾水(μL) | - | 30 |
工作液(μL) | 170 | 170 |
在微量玻璃比色皿/96孔板中分別加入上述試劑,充分混勻后于420nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于45℃水浴3min,拿出迅速擦干測定190s時的吸光值A2,計(jì)算ΔA測定管= A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次) |
注意事項(xiàng):
1、工作液需臨用前配制,并且盡快使用,4℃保存一周,若變色則不能使用。
2、測定前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請將樣本用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,OD值變化不超過0.05。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取0.1g香菇加1mL提取液進(jìn)行樣本處理,取上清后按照測定步驟操作,用微量玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.8963-0.1004=0.7959,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0729-0.0542=0.0187,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.7959-0.0187=0.7772,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
漆酶酶活(U/g 質(zhì)量)=61.7×ΔA÷W=61.7×0.7772÷0.1=479.53 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0200/BC0205 過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒
BC0090/BC0095 過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒
漆酶活性檢測試劑盒 微量法 漆酶活性檢測試劑盒 微量法
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