目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1445-100T/48S線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性測(cè)試盒 微量法
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更新時(shí)間:2024-07-28 14:58:33瀏覽次數(shù):1024評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號(hào) | BC1435 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 測(cè)定意義:生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要 |
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ/ATP合酶活性檢測(cè)試劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào):BC1445
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體50mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體6mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體3mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑六 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑七 | 液體10mL×1瓶 | 常溫保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前每支加入1.11 mL雙蒸水,充分溶解備用,分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;
試劑五:臨用前加入10mL雙蒸水,充分溶解;-20℃可保存4周;
試劑六:臨用前加入10mL雙蒸水,充分溶解;2-8℃可保存4周;
標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL磷標(biāo)液,臨用前取50μL 10 μmol/mL磷標(biāo)液,加入1950μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配(實(shí)驗(yàn)中每管需要40μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積);
定磷試劑的配制:根據(jù)用量將H2O:試劑五:試劑六:試劑七=20mL:10mL:10mL:10mL(約100T)混合備用,配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染(請(qǐng)根據(jù)需要,用多少配多少)。
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。
產(chǎn)品說明:
線粒體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,由F1和F0兩個(gè)亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成,也可逆過程水解ATP。此外,復(fù)合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細(xì)菌中。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。
復(fù)合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi,通過測(cè)定Pi增加速率來測(cè)定復(fù)合體Ⅴ活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng):
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過高(高于1),可用蒸餾水稀釋上清液后再測(cè)定。計(jì)算結(jié)果時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。
測(cè)定胞漿時(shí),定磷后反應(yīng)液可能會(huì)有絮凝產(chǎn)生,測(cè)定前混合均勻即可,并不影響測(cè)定結(jié)果。
推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活,若用樣本質(zhì)量計(jì)算,則需加測(cè)胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
本試劑盒試劑足夠完成100管反應(yīng)。
附:使用樣本重量計(jì)算公式:(樣本檢測(cè)數(shù)為100T/24S)
上清中復(fù)合體Ⅴ活力的計(jì)算:
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1nmol無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣本))÷T
=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
ΔA1:上清測(cè)定值;C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.25μmol/mL;1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1μmol=1000nmol;V提取:加入提取液體積,1.0mL;V樣本:樣本體積,0.05mL;V酶促:酶促反應(yīng)總體積,0.12mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
B、沉淀中復(fù)合體Ⅴ活力的計(jì)算:
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣本))÷T
=12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
ΔA2:沉淀測(cè)定值;C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.25μmol/mL;1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1μmol=1000nmol;V提?。撼恋碇貞殷w積,0.6mL;V樣本:樣本體積,0.05mL;V酶促:酶促反應(yīng)總體積,0.12mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
C、樣本復(fù)合體Ⅴ總活力的計(jì)算:
樣本復(fù)合體Ⅴ總活力即為上清中復(fù)合體Ⅴ活力與沉淀中復(fù)合體Ⅴ活力之和。
按樣本質(zhì)量計(jì)算:復(fù)合體Ⅴ(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W+12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
取0.1g兔子腎臟進(jìn)行樣本處理,上清液和沉淀都稀釋4倍后按照測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.379-0.047=0.332,上清液的ΔA1=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.679-0.119=0.560,沉淀的ΔA2=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.773-0.052=0.721,則按樣本質(zhì)量計(jì)算得:上清中復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×4(稀釋倍數(shù))=1349.4 U/g 質(zhì)量沉淀中復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×4(稀釋倍數(shù))=1042.4 U/g 質(zhì)量復(fù)合體Ⅴ(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×4+12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×4=2391.8 U/g 質(zhì)量。
取0.1g冬青進(jìn)行樣本處理,上清液和沉淀都稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.379-0.047=0.332,上清液的ΔA1= A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.535-0.320=0.215,沉淀的ΔA2=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.357-0.089=0.268,則按樣本質(zhì)量計(jì)算得:上清中復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2(稀釋倍數(shù))=259.04 U/g 質(zhì)量 沉淀中復(fù)合體Ⅴ活性(U/g 質(zhì)量)=12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2(稀釋倍數(shù))=193.73 U/g 質(zhì)量復(fù)合體Ⅴ(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2+12×ΔA2÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2=452.77 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)
Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J].Free Radical Biology and Medicine,2019,134:229-238.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0510/BC0515 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ活性檢測(cè)試劑盒
BC3230/BC3235 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測(cè)試劑盒
BC3240/BC3245 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性檢測(cè)試劑盒
BC0940/BC0945 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性檢測(cè)試劑盒
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性測(cè)試盒 微量法 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性測(cè)試盒 微量法
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