6-磷酸葡萄糖酸
脫氫酶（6PGDH）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào): BC2105
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前配制，加入2.2 mL試劑一，混勻；

2. 試劑三：臨用前配制，加入2 mL試劑一，混勻。

產(chǎn)品說(shuō)明：
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）依次催化NADPH合成，與能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP⁺生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP⁺沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340nm吸光度增加速率，計(jì)算6PGDH活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 試劑二和試劑三須現(xiàn)配現(xiàn)用，當(dāng)天未用完試劑保存在4℃，可保存1周。

2. 樣本處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在提取當(dāng)日完成酶活性測(cè)定，粗酶液避免反復(fù)凍融；

3. 若樣本初始（0s）讀值大于0.5且ΔA測(cè)定小于0.1，可嘗試將樣本進(jìn)行稀釋后測(cè)定。

4. 使用96孔板測(cè)定時(shí)，可根據(jù)樣本數(shù)量將試劑一（預(yù)熱后）、二、三預(yù)混為工作液，因是根據(jù)反應(yīng)速率計(jì)算酶活，為保證每個(gè)樣本的反應(yīng)時(shí)間盡量一致不推薦同時(shí)測(cè)過(guò)多樣本。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 稱約0.1g腎臟組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清稀釋5倍，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.4866-0.3035=0.1831，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.0325-0.0269=0.0056，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：6PGDH酶活性(U/g 質(zhì)量) =536×(ΔA測(cè)定-ΔA空白)÷W×5（稀釋倍數(shù)）=4757 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.

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