硫氧還蛋白還原酶（TrxR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC1155
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加入1.667 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑-20℃保存2周。

2. 試劑四：體積量少，請(qǐng)離心后再使用。臨用前根據(jù)樣本數(shù)量將試劑四用無(wú)水乙醇稀釋10倍后使用。

產(chǎn)品說(shuō)明：
    TrxR（EC，EC 1.8.1.9）是一種NADPH依賴(lài)的包含FAD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員，與硫氧還蛋白以及NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR與GR活性類(lèi)似，催化*還原生成GSH，是谷*甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。
TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP⁺，TNB在412nm有特征吸收峰，但還原型谷*甘肽與DTNB同樣能反應(yīng)生成TNB，因此本試劑盒利用2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型谷*甘肽，通過(guò)測(cè)定412nm波長(zhǎng)處TNB的增加速率，即可計(jì)算TrxR活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)節(jié)移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、冰和無(wú)水乙醇。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 哺乳動(dòng)物組織及血液制品TrxR活力測(cè)定時(shí)，一般須用蒸餾水稀釋5倍左右；測(cè)定過(guò)程操作須迅速。

2. 由于試劑一中含有一定濃度的蛋白（約0.1mg/mL），所以在測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需要減去提取液本身的蛋白含量。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g月季花朵加入1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用微量玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA =（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.8600-0.8177）-（0.0792-0.0727）=0.00358，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

TrxR活性（U/g 質(zhì)量）=147×ΔA÷W=53.626 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠肝臟樣本加入1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清稀釋4倍置冰上，按照測(cè)定步驟操作，用微量玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA =（A2測(cè)定-A1測(cè)定）-（A2空白-A1空白）=（0.8538-0.2101）-（0.0792-0.0727）=06371，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

TrxR（U/g 質(zhì)量）=147×（ΔA測(cè)定管-ΔA空白管）÷W×4（稀釋倍數(shù)）=3746.148 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Li B, Li D, Jing W, et al. Biogenic selenium and its hepatoprotective activity[J]. Scientific reports, 2017, 7(1): 1-11.

2. Zhang L, Fan J, He J, et al. Regulation of ROS–NF‐κB axis by tuna backbone derived peptide ameliorates inflammation in necrotizing enterocolitis[J]. Journal of cellular physiology, 2019, 234(8): 14330-14338.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
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