胃*白酶活性檢測
試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2325
規(guī)格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入10 mL試劑二，充分溶解；

2. 試劑三：臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。

產品說明：
胃*白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質成小肽段。一般用于神經性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃*白酶分泌的減少。
胃*白酶可催化血紅蛋白水解，水解產物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織加入1mL提取液進行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min 以上，調節(jié)波長至275nm，蒸餾水調零。

2. 操作表：

注意：對照管后加樣本，而測定管先加樣本

• 胃*白酶活性計算

1. 用微量石英比色皿

1、按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按樣本質量計算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/g 質量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W
3、按液體體積計算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T= 7.86×?A
Cpr：樣本蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定；W：樣本質量，g；V反總：反應總體積，0.22mL；V提：粗酶液總體積，1mL；T：催化反應時間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V液：液體體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，1cm。
B、用96孔UV板
1、按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T = 1.31×?A÷Cpr
2、按樣本質量計算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/g 質量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T =1.31×?A÷W
3、按液體體積計算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T =13.1×?A
Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定；W：樣本質量，g；V反總：反應總體積，0.22mL；V提：粗酶液總體積，1mL；T：催化反應時間，10min；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V液：液體體積，0.1mL；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程，0.6cm。
實驗實例：

1. 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨，10000rpm 4℃離心10分鐘，取上清稀釋2倍，置冰上，按照測定步驟操作，使用微量石英比色皿測得計算?A=A測定-A對照=1.3345-1.2195=0.115，按樣本質量計算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 質量）=0.786×?A÷W×2（稀釋倍數(shù)）=1.808 U/g 質量。
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