土壤有效硼含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3025
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入12mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑可以2-8℃保存四周；

2. 試劑三：臨用前取1瓶加入6mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑可以2-8℃保存一周；

3. 試劑五：臨用前取1瓶加入2mL蒸餾水充分溶解，再加入0.5mL試劑三混勻，用不完的試劑可以2-8℃保存二周；

4. 標準品：10mg硼酸。臨用前加入0.81mL蒸餾水充分溶解，配制成200μmol/mL標準溶液待用，用不完的試劑2-8℃可保存兩周。

產品說明：
硼是植物正常發(fā)育的微量元素，能夠促進植物生長茂盛和生殖器官的正常發(fā)育。根據(jù)土壤有效磷含量，合理供給硼元素是提高作物產量和品質的關鍵措施之一。
硼與甲亞胺在弱酸條件下形成棕黃色配合物，在420nm有特征吸收峰，即可計算土壤有效硼含量
技術指標：
低檢出限：0.0141μmol/mL
線性范圍：0.015625-2μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽、冰、蒸餾水、30-50目篩。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

• 樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可參考文獻）

1. 新鮮土樣自然風干或37℃烘箱烘干，過30-50目篩。

2. 按照土壤質量（g）：蒸餾水體積（mL）為1：5-10的比例（建議稱取約0.2g土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，沸水中浸提10min。

3. 自然冷卻至室溫，加入50μL試劑一，震蕩5min。

4. 加入100μL試劑二，震蕩3min。

5. 加入100μL試劑三，充分震蕩褪去紫色。

6. 8000g，25℃離心10min，取上清液待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至420nm，分光光度計用蒸餾水調零。

2. 標準液的稀釋：將200μmol/mL標準液用蒸餾水倍比稀釋至1.5、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL的標準液備用，標準液稀釋可參考下表：

備注：實驗中需標準品40µL。

1. 樣本測定：

三、土壤有效硼的計算

1. 標準曲線的繪制：

以標準品的濃度為x軸（x，μmol/mL），各個標準溶液對應的吸光度為y軸（y，ΔA標準），繪制標準曲線，建立標準方程y=kx+b，將ΔA（y，ΔA測定）帶入方程得到x（μmol/mL）。

1. 土壤有效硼計算：

有效硼含量（mg/kg土樣）=10.81×x×V樣總÷1000÷（W÷1000）=13.51×x÷W
W：樣本質量，g；V樣總：樣本總體積，1.25mL；10.81：硼分子量，10.81μg/μmol；1000：單位換算系數(shù)，1mmol=1000μmol，1kg=1000g。


注意事項：

1. 顯色時嚴格控制溫度并且避光，以免顯色劑見光分解。

2. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

實驗實例：

1. 取約0.2g處理好的土樣，加入1mL蒸餾水，按照樣本處理步驟操作，離心取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A空白管=0.210-0.146=0.064，帶入標準曲線y=0.9827x+0.0033，得出x=0.0618，按計算公式計算有效硼含量得：

有效硼含量（mg/kg土樣）=13.51×x÷W=13.51×0.0618÷0.2=4.1746mg/kg土樣。
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