目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC0565-100T/48S酸性轉化酶(AI)活性檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號 | BC0565 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),綜合 |
主要用途 | 酸性轉化酶(AI)活性檢測 |
酸性轉化酶(AI)活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC0565
規(guī)格:100T/48S
產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體100mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、試劑二:臨用前加入20mL試劑一充分溶解備用;用不完的試劑2-8℃保存;
2、標準品:10mg葡萄糖,臨用前加入1mL蒸餾水溶解,制備10mg/mL葡萄糖標準液備用。
產品說明:
蔗糖轉化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據(jù)最適 pH,Ivr分為酸性轉化酶(AI)和中性轉化酶(NI)兩種類型。AI(EC 3.2.1.26)主要存在于細胞液泡或自由空間中,最適 pH 為4.5~5.0(酸性),通過降解液泡中蔗糖,調節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實內糖類的積累。
AI催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征光吸收,在一定范圍內540nm光吸收增加速率與AI活性成正比。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產品資料"附件 注意事項:
1、如果加入試劑三,煮沸10min后有混濁物出現(xiàn),建議離心除去沉淀后,取上清測定吸光度;
2、如果吸光值大于1,可以用蒸餾水將樣本稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù))。
3、由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
實驗實例:
取0.1g木槿加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定=0.574,ΔA對照=0.378,ΔA=A測定-A對照=0.574-0.378=0.196,帶入標準曲線y=0.7408x - 0.0289,計算x=(0.196+0.0289)/0.7408=0.304,按樣本質量計算酶活得:
AI活性(U/g質量)=33.3×x÷W×稀釋倍數(shù)=33.3×0.304÷0.1×2=202.46 U/g 質量。
參考文獻:
Huang Y W, Nie Y X, Wan Y Y, et al. Exogenous glucose regulates activities of antioxidant enzyme, soluble acid invertase and neutral invertase and alleviates dehydration stress of cucumber seedlings[J]. Scientia horticulturae, 2013, 162: 20-30.
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