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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4185-100T/96S莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
  • 莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC4185-100T/96S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間：2024-04-12 15:06:14瀏覽次數(shù)：580評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號 BC4185 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 莽草酸脫氫酶(SD)活性檢測
儲存條件
-20℃
莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
單位
盒
推薦
若使用96孔板測定，需使用96孔UV板，推薦貨號YA0602
英文名稱
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/96S


莽草酸脫氫酶（SD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC4185
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體100 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體10 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×1瓶2-8℃保存
試劑三粉劑×1瓶-20℃保存
溶液的配制：

  1. 提取液：內(nèi)含不溶物，用前搖勻。

  2. 試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水溶解。

  3. 試劑三：臨用前每瓶加入10 mL蒸餾水溶解。

  4. 工作液的配制：根據(jù)用量按照試劑一：試劑二：試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻，備用，用前25℃預(yù)熱15min。

產(chǎn)品說明：
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（加入前搖勻））進行冰浴勻漿，然后，8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
2、細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3、液體：直接檢測。
二、測定步驟

  1. 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，紫外分光光度計蒸餾水調(diào)零。

  2. 工作液25℃預(yù)熱10min以上。

  3. 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：

試劑名稱空白管測定管
工作液（µL）190190
樣本（µL）
10
蒸餾水（µL）10
加入樣本即開始計時，充分混勻后于340nm處測定20s時的吸光值A1和5min20s時的吸光值A2，計算ΔA測定管=A2測定-A1測定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。
三、SD酶活計算
A、按微量石英比色皿計算：

  1. 按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=643×ΔA÷Cpr

  1. 按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：每克樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD酶活（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=643×ΔA÷W

  1. 按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：每104個細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））÷T
=643×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

  1. 按液體體積計算

酶活定義：每mL液體樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷V樣÷T=643×ΔA
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4L；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，5min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol；V樣總：加入提取液體積，1mL。
B、按96孔UV板計算：
將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進行計算即可。

注意事項：

  1. 樣本提取上清液置于冰上待測，且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測完。

  2. 樣本的蛋白濃度需自行測定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1 mg/mL），所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。

  3. ΔA大于1時，建議將樣本稀釋后再進行測定。當(dāng)ΔA小于0.01時，可以延長反應(yīng)時間（10min或15min）來測定。

  4. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.01。

實驗實例：

  1. 取0.1g稗草，加入1mL提取液，進行樣本處理，取上清按照測得步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.2771-0.2433=0.0338，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0338，按照樣本質(zhì)量計算得：SD酶活（U/g 質(zhì)量）=643×ΔA÷W=217.334 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶（ICL）活性檢測檢測試劑盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒

莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒  微量法 莽草酸脫氫酶活性檢測試劑盒  微量法


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