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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4175-100T/96S肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
  • 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC4175-100T/96S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-12 15:16:52瀏覽次數(shù):542評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號 BC4175-100T/96S 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測
儲存條件
-20℃
中文名稱
肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
單位

推薦
若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
英文名稱
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC4175
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體120 mL×1瓶2-8℃保存
試劑一粉劑×1-20℃保存
試劑二液體×12-8℃保存
試劑三液體25 mL×1瓶2-8℃保存
溶液的配制:
  1. 提取液:內(nèi)含不溶物,使用前搖勻。

  2. 試劑一:臨用前加入5 mL試劑三溶解??扇芙夂蠓盅b-20保存,避免反復(fù)凍融。

  3. 試劑二:液體置于試劑瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻,配好后2-8℃保存。

  4. 工作液的配制:將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2(V:V:V)的比例配制工作液,工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明:
CAD 是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下測定NADPH消耗速率,即可反映CAD活性。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清,置冰上待測。
2、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟
 
  1. 紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,紫外分光光度計蒸餾水調(diào)零。

  2. 操作表:在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑:

試劑名稱空白管測定管
樣本(µL)
20
蒸餾水(µL)20
工作液(µL)180180
在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于25℃水浴或培養(yǎng)箱5min(酶標儀有控溫功能可將溫度調(diào)至25℃),拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。
三、CAD酶活計算
A、按微量石英比色皿計算:
1、按蛋白濃度計算
酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:每g組織每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W
3、按細菌或細胞數(shù)量計算
酶活定義:每104個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
CAD酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T= 0.643×ΔA
εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5min500:細菌或細胞總數(shù),500萬;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。
B、按96UV板計算:
將將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進行計算即可。

注意事項:
  1. 當(dāng)A1小于0.8,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。

  2. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.04。

實驗實例:
  1. 取約0.1g三葉草葉,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清,按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測定計算ΔA測定管= A1測定-A2測定=1.7889-1.7045=0.0844ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9630-0.9433=0.0197,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0844-0.0197=0.0647按樣本質(zhì)量計算得:CAD酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W=208.0364 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2030/BC2035 異檸檬酸裂解酶(ICL)活性檢測檢測試劑盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒

肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

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