目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2385-100T/48S肝脂酶（HL）檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC2385 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：肝酯酶是脂肪分解酶,在肝實質(zhì)細胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細胞表面 |
肝脂酶（HL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2385
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
溶液的配制：
1、試劑三：臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解待用，用不完的 2-8℃保存8周；
2、試劑四：臨用前取1支加入1 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑可-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；
3、標準品：臨用前加入6.94 mL丙 酮，配成10 μmol/mL α-萘酚標準溶液，充分溶解待用，用不完的-20℃保存4周。
產(chǎn)品說明：
肝脂酶（hepaticlipase，HL）是一種脂肪分解酶，在肝實質(zhì)細胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細胞表面和竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面，可水解各種脂蛋白中的甘油三酯（TG）和磷脂（PL），使各種脂蛋白顆粒的大小和密度發(fā)生變化，當(dāng)血漿中的HL及其活性增高時，可導(dǎo)致血漿中低密度脂蛋白（LDL）水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。
肝脂酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝脂酶活性成正相關(guān)。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、天平、低溫離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、 丙 酮、蒸餾水。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1 g，加入1 mL試劑一），加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10 min，取上清待測。
2、細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000︰1的比例（建議500萬細胞加入1 mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔7秒，總時間3 min）；然后于4℃，10000g離心10 min，取上清待測。
3、血清/血漿：直接測定。（若液體有渾濁則離心后進行測定）
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至595 nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑三在30℃預(yù)熱20 min以上。
3、 將10 μmol/mL 的標準溶液用試劑一稀釋為5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078 μmol/mL的標準溶液備用。
4、 標準品稀釋表
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 試劑一體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 10 | 100 | 100 | 5 |
2 | 5 | 100 | 100 | 2.5 |
3 | 2.5 | 100 | 100 | 1.25 |
4 | 1.25 | 100 | 100 | 0.625 |
5 | 0.625 | 100 | 100 | 0.3125 |
6 | 0.3125 | 100 | 100 | 0.15625 |
7 | 0.15625 | 100 | 100 | 0.078 |
實驗中每個標準管需20µL標準溶液。
5、 操作表（在1.5mLEP管或者96孔板中依次加入下列試劑）：
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
樣本（µL） | 20 | 20 | - | - |
標準溶液（µL） | - | - | 20 | - |
試劑一（µL） | 90 | 80 | 80 | 100 |
試劑二（µL） | - | 10 | 10 | 10 |
混勻，30℃反應(yīng)10 min | - | - | ||
試劑三（µL） | 80 | 80 | 80 | 80 |
試劑四（µL） | 10 | 10 | 10 | 10 |
充分混勻，測定595 nm處吸光值，分別記為A對照管、A測定管、A標準管和A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。（每個測定管需設(shè)一個對照管，空白管和標準管只需做1-2次） | ||||
三、HL酶活計算
1、 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA（y，ΔA）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2、 HL酶活的計算：
（1）按蛋白濃度計算
酶活定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（U/mg prot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）÷T=0.1x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（U/g 鮮重）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T=0.1x÷W
（3）按照細胞數(shù)量計算
酶活定義：每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（U/104 cell）=x×V樣÷（V樣×N÷V樣總）÷T=0.1x÷N
（4）按液體體積計算
酶活定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol的 α-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.1x
V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，10 min；N：細胞數(shù)量，以萬計。
注意事項：
1、 若樣本為動物肝臟，建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進行檢測，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、 若樣本為肥胖型動物血清或血漿，建議將樣本用試劑一稀釋5倍以上再進行檢測，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 當(dāng)ΔA大于1.3時，建議將樣本用試劑一稀釋后再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
實驗實例：
1、取0.1g大鼠肝臟，進行樣本處理，取上清稀釋24倍后按照操作步驟進行操作，使用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.605-0.046=0.559，帶入標準曲線y=0.265x+0.0033計算x=2.097，按照樣本質(zhì)量計算酶活得：
HL活性（U/g 質(zhì)量）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T×24=50.328 U/g 質(zhì)量。
2、取火雞血清稀釋6倍后按照操作步驟進行操作，使用96孔板測得ΔA=A測定管-A對照管=0.449-0.003=0.446，帶入標準曲線y=0.265x+0.0033計算x=1.671，按照樣本質(zhì)量計算酶活得：
HL活性（U/g 質(zhì)量）=x×V樣÷（W×V樣÷V樣總）÷T×6=1.003 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2340/BC2345 脂肪酶（LPS）活性檢測試劑盒
BC0620/BC0625 甘油三酯（TG）含量檢測試劑盒
BC2440/BC2445 脂蛋白酯酶（LPL）活性檢測試劑盒
BC0320/BC0325 植物中脂氧合酶（LOX）活性檢測試劑盒
BC0590/BC0595 游離脂肪酸（FFA）含量檢測試劑盒
肝脂酶（HL）檢測試劑盒 微量法 肝脂酶（HL）檢測試劑盒 微量法
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