目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4305-100T/48S外切β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號 | BC4305 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 外切β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶活性檢測 |
外切β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(C1)活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC4305
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前取1瓶加入3 mL蒸餾水溶解備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;2-8℃保存4周;
2、 標(biāo)準(zhǔn)品:5 μmol/mL 對硝基 苯* 溶液。
產(chǎn)品說明:
β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi),是微生物纖維素降解酶系的主要組分,也是水解天然纖維素的必需組分,C1酶作用于纖維素線狀分子的末端,水解β-葡萄糖苷鍵,每次切下1個纖維二糖分子。
C1能夠催化對*纖維二糖苷 (PNPC)生成對硝 基 苯*,后者在400 nm有特征光吸收。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、天平、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、組織:按照組織質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)為1 : 5~10 的比例(建議稱取0.1 g 組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心10 min,取上清置冰上待測。
2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)菌或真菌數(shù)量104個 : 提取液體積(mL)500~1000 : 1 的比例(建議500萬細(xì)菌或真菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3 s,間隔7s,總時間3min)然后10000g,4℃,離心10 min,取上清置冰上待測。
3、血清(漿)等液體:直接測定。
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至400 nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:取50μL 5 μmol/mL對硝 基 苯* 溶液,加入750μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.3125 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實驗中每管需要20μL,為減小實驗誤差,故配制大體積。)
3、 操作表(在1.5 mL離心管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(µL) | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
試劑一 | 80 | - | - | - |
蒸餾水 | - | 80 | 80 | 100 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | - | - | 20 | - |
樣本 | 20 | 20 | - | - |
置于37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱準(zhǔn)確反應(yīng)1h | - | - | ||
試劑二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
渦旋混勻后室溫放置2 min,吸取200 μL于微量玻璃比色皿或96孔板中測定400 nm下的的吸光度,分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測1-2次。
三、C1酶活計算
1、按照樣本蛋白濃度計算
酶活定義:每mg蛋白在反應(yīng)體系中每小時生成1 nmol對硝 基 苯*定義為一個酶活力單位。
C1 (U/mg prot) =ΔA測定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo))×1000×V樣÷(Cpr×V樣)÷T=312.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
2、按照樣本質(zhì)量計算
酶活定義:每g樣本在反應(yīng)體系中每小時生成1 nmol對硝 基 苯*定義為一個酶活力單位。
C1 (U/g 質(zhì)量)= ΔA測定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo))×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T=312.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
3、按照細(xì)菌或真菌數(shù)量計算
酶活定義:每104個細(xì)菌或真菌在反應(yīng)體系中每小時生成1 nmol對硝 基 苯*定義為一個酶活力單位。
C1 (U/104 cell)= ΔA測定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo))×1000×V樣÷(細(xì)菌或真菌數(shù)量×V 樣÷V樣總)÷T
=312.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)菌或真菌數(shù)量
4、按液體體積計算
酶活定義:每毫升液體在反應(yīng)體系中每小時催化生成1 nmol對 硝基 苯*為一個酶活力單位。
C1 (U/mL)= ΔA測定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo))×1000×V樣÷V樣÷T=312.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度:0.3125 μmol/mL;V樣:加入的樣本體積,0.02 mL;V樣總:加入的提取液體積,1 mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時間,1 h;細(xì)菌或真菌數(shù)量:以萬計;W:樣本質(zhì)量,g;1000:換算系數(shù),1 μmol=1000 nmol。
注意事項:
1、若吸光度大于1.5時,建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定。計算公式乘以稀釋倍數(shù)。
實驗實例:
1、 取0.1g香菇進(jìn)行樣本處理,離心取上清稀釋2倍后按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.454-0.047=1.407,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.292-0.047=0.245,根據(jù)樣本質(zhì)量計算酶活得:
C1(U/g 質(zhì)量)=312.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×2(稀釋倍數(shù))=312.5×1.407÷0.245÷0.1×2=35893 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0360/BC0365 β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒
BC2540/BC2545 纖維素酶(CL)活性檢測試劑盒
BC4290/BC4295 N-乙酰基-β-葡萄糖苷酶(NAG)活性檢測試劑盒
BC4440/BC4445 半纖維素含量檢測試劑盒
外切β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶試劑盒 外切β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶試劑盒
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