目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4335-100T/96S植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號 | BC4335 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 植物類胡蘿卜素含量檢測 |
植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC4335
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
提取液:自備80%丙 酮,將丙 酮:蒸餾水(V:V)=4:1混合待用,提供一個125mL空瓶。
產(chǎn)品簡介:
類胡蘿卜素(carotenoid)是一類重要的天然色素的總稱,普遍存在于動物、高等植物、真菌、藻類的黃色、橙紅色或紅色的色素之中。類胡蘿卜素是體內(nèi)維生素A的前體,同時還具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗癌、減輕心血管疾病及著色劑等作用。
植物的類胡蘿卜素存在于各種黃色質(zhì)體或有色質(zhì)體內(nèi);如黃葉,黃色花卉,黃色和紅色的果實和黃色塊根等組織,樣本通過溶劑萃取,分離提取類胡蘿卜素,在440±10nm處有特殊吸收峰。
大部分高等植物和藻類微生物的葉綠體內(nèi)也含有類胡蘿卜素,類胡蘿卜素主要吸收藍(lán)紫光,而葉綠素a和葉綠素b既吸收紅光又可吸收藍(lán)紫光。所以針對含葉綠體的組織,為排除葉綠素a和葉綠素b對類胡蘿卜素的干擾,根據(jù)經(jīng)驗公式先計算出葉綠素a和葉綠素b的含量,再進(jìn)一步得出類胡蘿卜素的含量;針對不含葉綠素的組織可以直接根據(jù)類胡蘿卜素的經(jīng)驗消光系數(shù)進(jìn)行計算。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))、天平、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、10 mL離心管/試管、蒸餾水和丙 酮。
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、新鮮植物葉片(去掉中脈)或其他組織用蒸餾水洗干凈,然后吸干表面水分,稱取約0.1g,剪碎放入研缽或勻漿器中。
2、加入1mL蒸餾水,少量試劑一(約10mg),在黑暗或弱光條件下充分研磨,轉(zhuǎn)入10mL離心管或試管中。
3、用提取液沖洗研缽或勻漿器,將所有沖洗液轉(zhuǎn)入10mL離心管或試管中,用提取液定容至10mL,置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3h(期間可以顛倒混合2次),觀察底部組織殘渣接近于白色則提取全,若組織殘渣未全變白,繼續(xù)浸提至組織殘渣顏色接近于白色。
A、黃色或其他非綠色組織(不含葉綠體)類胡蘿卜素含量測定步驟:
1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至440nm,分光光度計用提取液調(diào)零。
2、樣本檢測(微量玻璃比色皿檢測不用測空白管,用96孔板檢測空白管只需檢測1-2次)
試劑名稱(µL) | 空白管 | 測定管 |
樣本 | - | 200 |
提取液 | 200 | - |
用分光光度計檢測:于微量玻璃比色皿快速測定440nm處測定管吸光值,記為A440。 用酶標(biāo)儀檢測:于96孔板,快速測定440nm處吸光值,分別記為A440空白管、A440測定管,ΔA440=A440測定管-A440空白管。 |
B、新鮮植物葉片或其他綠色組織(含葉綠體)類胡蘿卜素含量測定步驟:
1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)多波長至470nm、646nm和663nm,分光光度計用提取液調(diào)零。
2、 樣本檢測(微量玻璃比色皿檢測不用測空白管,用96孔板檢測空白管只需檢測1-2次)
試劑名稱(µL) | 空白管 | 測定管 |
樣本 | - | 200 |
提取液 | 200 | - |
用分光光度計檢測:于微量玻璃比色皿快速測定470nm、646nm和663nm處測定管吸光值,分別記為A470、A646和A663。 用酶標(biāo)儀檢測:于96孔板,快速測定470nm、646nm和663nm處吸光值,分別記為A470空白管、A470測定管、A646空白管、A646測定管、A663空白管、A663測定管。計算ΔA470=A470測定管-A470空白管、ΔA646=A646測定管-A646空白管、ΔA663=A663測定管-A663空白管。 |
注意:若上層浸提液有殘渣,可吸取1mL上層浸提液置于1.5mL棕色EP管,常溫下4000r/min離心5min,再取上清液檢測;若使用聚苯乙烯材質(zhì)的96孔板,請在加樣后5min內(nèi)盡快測定完成。
三、類胡蘿卜素含量的計算
A、黃色或其他非綠色組織(不含葉綠體)類胡蘿卜素含量的計算公式:
1、按微量玻璃比色皿計算
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=A440÷(ε×d)×V 樣總×1000÷W×F=0.04×A440×F÷W
V 樣總:提取液總體積,0.01L;1000:單位換算系數(shù),1g=1000mg;ε:類胡蘿卜素經(jīng)驗消光系數(shù),250L/g/cm;d:比色皿光徑,1cm;F:稀釋倍數(shù);W:樣本質(zhì)量,g。
2、按96孔板計算
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=ΔA440÷(ε×d)×V 樣總×1000÷W×F=0.067×ΔA440×F÷W
V 樣總:提取液總體積,0.01L;1000:單位換算系數(shù),1g=1000mg;ε:類胡蘿卜素經(jīng)驗消光系數(shù),250L/g/cm;d:96孔板光徑,0.6cm;F:稀釋倍數(shù);W:樣本質(zhì)量,g。
B、新鮮植物葉片或其他綠色組織(含葉綠體)類胡蘿卜素含量的計算公式:
1、按微量玻璃比色皿計算
Ca(mg/L)=12.21×A663-2.81×A646
Cb(mg/L)=20.13×A646-5.03×A663
類胡蘿卜素濃度:Cc(mg/L)=(1000×A470-3.27×Ca-104×Cb)÷229=4.367×A470-0.014×Ca-0.454×Cb
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=Cc×V提取×F÷W=0.01×Cc×F÷W
V提?。禾崛∫后w積,0.01L;F:稀釋倍數(shù);W:樣本質(zhì)量,g。
2、按96孔板計算:
Ca(mg/L)=(12.21×ΔA663-2.81×ΔA646)÷0.6 =20.35×ΔA663-4.83×ΔA646
Cb(mg/L)=(20.13×ΔA646-5.03×ΔA663)÷0.6 =33.55×ΔA646-8.38×ΔA663
類胡蘿卜素濃度:Cc(mg/L)=(1000×ΔA470÷0.6-3.27×Ca-104×Cb)÷229=7.278×ΔA470-0.014×Ca-0.454×Cb
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=Cc×V提取×F÷W =0.01×Cc×F÷W
V提?。禾崛∫后w積,0.01L;F:稀釋倍數(shù);W:樣本質(zhì)量,g;0.6:光徑比例,0.6cm(96孔板光徑):1cm(比色皿光徑)。
注意事項:
1. 若不確定組織中有無葉綠素影響,可取樣本提取液采用分光光度計在波長400-700nm下進(jìn)行掃描,看波長640-670nm之間有無波峰,有波峰則為有葉綠素,反之則無。
2. 若使用聚苯乙烯材質(zhì)的96孔板,請在加樣后5min內(nèi)盡快測定完成。
3. 當(dāng)A超過1時,建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)F。
4. 為了避免色素見光分解,操作時應(yīng)盡量避光,研磨或勻漿時應(yīng)盡量縮短時間。
5. 提取液易揮發(fā),操作時做好防護(hù)措施。
1. 取0.1g黃色花朵加入1mL蒸餾水、少量試劑一(約10mg),在黑暗或弱光條件下充分研磨,轉(zhuǎn)入10mL離心管,提取液沖洗研缽或勻漿器,用提取液定容至10mL,置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3h(期間可以顛倒混合2次),按照操作步驟A,用96孔板測定并計算ΔA440=A440測定管-A440空白管=0.202-0.045=0.157,計算含量得:
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=0.067×A440÷W=0.1052 mg/g 質(zhì)量。
2. 取0.1g綠蘿葉片加入1mL蒸餾水、少量試劑一(約10 mg),在黑暗或弱光條件下充分研磨,轉(zhuǎn)入10 mL離心管,提取液沖洗研缽或勻漿器,用提取液定容至10 mL,置于黑暗條件或者包上錫箔紙浸提3 h(期間可以顛倒混合2次),按照操作步驟B,用96孔板測定并計算ΔA470=A470測定管-A470空白管=0.415-0.043=0.372、ΔA646=A646測定管-A646空白管=0.189-0.042=0.147、ΔA663=A663測定管-A663空白管=0.379-0.042=0.337。計算含量得:
Ca(mg/L)=20.35×0.337-4.83×0.147=6.145 mg/L;
Cb(mg/L)=33.55×0.147-8.38×0.337=2.108 mg/L;
Cc(mg/L)=7.278×ΔA470-0.014×Ca-0.454×Cb=1.662 mg/L;計算含量得:
類胡蘿卜素含量(mg/g 質(zhì)量)=0.01×Cc×F÷W =0.1662 mg/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0990/BC0995 植物葉綠素含量檢測試劑盒
BC2210/BC2215 3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測試劑盒
BC3400/BC3405 焦磷酸:果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒
植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒 微量法 植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒 微量法
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)