Caspase-1活性檢測試劑盒說明書
比色法
貨號：BC3810
規(guī)格：20T、50T、100T
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：分裝-20℃保存。

2. 試劑二：分裝-20℃保存。

3. 標準液：pNA標準溶液，5 mmol/L。標準溶液在4℃條件下為渾濁狀態(tài)，溶解即可變?yōu)槌吻鍫顟B(tài)，不影響使用。

4. 標準品稀釋液配制：取9 mL試劑一加入1 mL試劑二，充分混勻待用。（也可按照試劑一：試劑二=9:1的比例，自行配制）。

產(chǎn)品說明：
Caspase是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-1是可剪切 IL-1b和IL-18前體產(chǎn)生活性細胞因子的caspase。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調(diào)節(jié)細胞凋亡，并通過對細胞因子前體的剪切來調(diào)控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。基于Caspase-1特異水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA)，釋放的游離硝 基苯胺pNA在405 nm有最大吸收峰。采用可見光光度比色法測定pNA而得到Caspase活性。適用于檢測哺乳動物組織、細胞Caspase-1活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件

注意事項：
1、由于試劑二一中含有還原劑（DTT），建議將樣品用水稀釋2倍后，用Bradford法測定蛋白濃度，以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。
2、Caspase活性測定值低最常見的原因是細胞未發(fā)生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測最佳的觀察點。
3、所測樣本的值高于標準曲線，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。
相關發(fā)表文獻：

1. Ren N, Jiang T, Wang C, et al. LncRNA ADAMTS9-AS2 inhibits gastric cancer (GC) development and sensitizes chemoresistant GC cells to cisplatin by regulating miR-223-3p/NLRP3 axis[J]. Aging (Albany NY), 2020, 12(11).

2. Chai D, Qiu D, Zhang Z, et al. Ab sent in melanoma 2 enhances anti‐tumour effects of CAIX promotor controlled conditionally replicative adenovirus in renal cancer[J]. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2020.

3. Liao T, Ding L, Wu P, et al. Chrysin Attenuates the NLRP3 Inflammasome Cascade to Reduce Synovitis and Pain in KOA Rats[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2020, Volume 14:3015-3027.

參考文獻：

1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J, 1997, 326: 1-16.

2. Janicke R U, Sprengart M L, Wati M R, et al. Emerging role of caspase-3 in apoptosis[J]. Cell Death and Differentiation, 1999, 6:99-104.

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