半纖維素含量檢測(cè)試劑盒說明書

微量法

貨號(hào)：BC4445

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：80%乙醇自備；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg D-木糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解配制成10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說明：

半纖維素是指在植物細(xì)胞壁中與纖維素共生、可溶于堿溶液，遇酸后遠(yuǎn)較纖維素易于水解的那部分植物多糖，廣泛存在于植物中，其分布因植物種屬、成熟程度、早晚材、細(xì)胞類型及其形態(tài)學(xué)部位的不同而有很大差異。一種植物往往含有幾種由兩或三種糖基構(gòu)成的半纖維素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)各不相同。半纖維素是一種新型的可利用能源。

半纖維素在一定條件下水解為還原性糖類，還原糖在堿性條件下與3，5-二硝基水楊酸（DNS）加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，DNS則被還原為棕紅色3-氨基-5-硝基水楊酸，在540nm處具有特征吸收峰，通過吸光值的變化即可定量檢測(cè)半纖維素的含量。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.1516 mg/mL

線性范圍：0.2-1 mg/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

天平、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、30~50目篩、蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

樣本自然風(fēng)干或用烘箱烘干至恒重，研缽充分研磨后，過30~50目篩。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至540 nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋至1、0.9、0.8、0.6、0.4、0.2 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。

3、 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需80µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 操作表（在1.5 mL EP管中操作）：

三、半纖維素含量計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，mg/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（x，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測(cè)定（x，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（y，mg/mL）。

2、半纖維素含量的計(jì)算：

半纖維素含量（mg/g 干重）= y× V樣總÷W×F= y÷ W×F

V樣總：加入提取液體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1、如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

2、建議將加入提取液二離心后的上清液稀釋10~20倍后檢測(cè)。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。

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