生*素含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
高效液相色譜法
注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào): BC4804
規(guī)格:50T/48S

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
生*素又稱維生素 H、輔酶 R，是水溶性*生素，也屬于維生素 B 族，B7。生*素作為羧化酶
的輔酶，是參與糖異生、脂肪酸合成與氨基酸代謝的物質(zhì)，是一種維持人體自然生長(zhǎng)、發(fā)
育和正常人體機(jī)能健康必要的營(yíng)養(yǎng)素。
生*素在 210 nm 處存在紫外吸收，可利用紫外檢測(cè)器測(cè)定其含量。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
高效液相色譜儀（Polaris C18-A 色譜柱（4.6×250 mm），紫外檢測(cè)器（VWD））、臺(tái)式離心
機(jī)、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管（1.5 mL）、針頭式過(guò)濾器（水系） 、注射器、抽濾器、
濾膜（水系、有機(jī)系）、棕色進(jìn)樣瓶、超純水、甲醇（色譜純）。

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 30 mL ×1 瓶，4℃保存。本提取液中含有不溶物，需搖勻后使用。
試劑一：液體 5 mL ×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 1.5 mL ×1 瓶, 4℃保存。
試劑三：粉劑×2 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 1 mL 0.1 mol/L KOH 配制成 5 mg/mL 生*素標(biāo)
準(zhǔn)溶液，4℃密封保存，避免陽(yáng)光直射。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 將 1 瓶試劑三溶解到 1000 mL 超純水中，再加入 0.55 mL 的試劑二，混勻，得到流動(dòng)相 A。
2. 將 1000 mL 配制好的流動(dòng)相 A、甲醇（色譜純）用濾膜抽濾。（配制好的流動(dòng)相 A 采用 0.22 µm
水系濾膜抽濾，甲醇采用 0.45 µm 有機(jī)系濾膜抽濾）。
3. 將抽濾好的流動(dòng)相超聲 20 min，除去氣泡。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：將 5 mg/mL 的生*素標(biāo)準(zhǔn)溶液采用倍比稀釋的方法分別用蒸餾水稀釋成
1000μg/mL、500 μg/mL、100 μg/mL、20 μg/mL、4 μg/mL 的生*素標(biāo)準(zhǔn)溶液。（標(biāo)準(zhǔn)品濃度僅供參
考，可根據(jù)實(shí)際樣品濃度進(jìn)行調(diào)整）。4℃避光保存（密封），測(cè)試前采用水系針頭式過(guò)濾器過(guò)濾
到棕色進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，待測(cè)。

注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒提取液中含有不溶物，需搖勻后使用。
2. 測(cè)試完畢后，需要用高濃度的超純水相沖洗色譜柱（約 20-30 個(gè)柱體積），以防阻塞色譜柱，再
用高濃度的有機(jī)相沖洗色譜柱，最后按柱子的種類規(guī)范沖洗，防止損傷色譜柱。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)要根據(jù)樣品中生*素的濃度確定，樣品中生*素的峰面積必須在不同濃度的標(biāo)
準(zhǔn)品溶液的峰面積之內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)只是一個(gè)參考。若樣本中生*素濃度過(guò)高，建議用蒸
餾水稀釋后再測(cè)。
4. 若樣本量過(guò)大，建議每天測(cè)試一次標(biāo)準(zhǔn)溶液（一個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液即可），以確定相應(yīng)的保留時(shí)
間，待測(cè)溶液測(cè)試前須放置至室溫狀態(tài)。
5. 為了排除梯度洗脫基線漂移的影響，可進(jìn)行一次空白檢測(cè)。

生*素含量檢測(cè)試劑盒