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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-常量法>>脂肪酸代謝系列>> BC2420-50T/48S磷脂酶C(PLC)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝

磷脂酶C(PLC)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
  • 磷脂酶C(PLC)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) BC2420-50T/48S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-07-08 21:42:07瀏覽次數(shù):921評(píng)價(jià)

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/48S
貨號(hào) BC2420 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 磷脂酶C(PLC)檢測(cè)
磷脂酶C(PLC)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
有效期
6個(gè)月
儲(chǔ)存條件
-20℃
單位

英文名稱
Phospholipase C (PLC Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

磷脂酶CPLC)活性檢測(cè)試劑盒說明書

可見分光光度法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號(hào):BC2420

規(guī)格:50T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液一

液體60mL×1

2-8℃保存

提取液二

液體0.6mL×1

-20℃保存

試劑一

液體60mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體35mL×1

-20℃保存

試劑三

液體30mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1. 提取液二:試劑易揮發(fā),用完后快速擰蓋,封口封纏口。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL對(duì)硝基苯*溶液。

3. 提取液的配制:臨用前根據(jù)樣本量將提取液一與提取液二1:1混合,切勿一次性全部混合,用多少配多少。

產(chǎn)品說明:

磷脂酶CEC 3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動(dòng)植物的組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要作用。

磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對(duì)硝基苯*,在410nm處有特征吸收峰。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、超速冷凍離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

操作步驟:

一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

1、 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例加入提取液,建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液,冰浴勻漿后于4℃10 000g離心5min;取全部上清再于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

2、 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃10 000g離心5min;取全部上清再于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。

3、 血清(漿):直接測(cè)定。      

二、測(cè)定步驟

1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到410nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5μmol/mL對(duì)硝基苯*溶液用蒸餾水稀釋至0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.0390.02、0.01μmol/mL。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

序號(hào)

稀釋前濃度(μmol/mL

標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

蒸餾水體積(µL

稀釋后濃度(μmol/mL

1

5

100

700

0.625

2

0.625

400

400

0.3125

3

0.3125

400

400

0.15625

4

0.15625

400

400

0.078

5

0.078

400

400

0.039

6

0.039

400

400

0.02

7

0.02

400

400

0.01

備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4、 樣本測(cè)定:

試劑名稱 (μL)

空白管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

標(biāo)準(zhǔn)品

-

-

100

樣品

-

100

-

試劑一

100

-

-

試劑二

500

500

500

充分混勻,37℃反應(yīng)30min

-

試劑三

400

400

400

充分混勻,于1mL玻璃比色皿,測(cè)定410nm處吸光值,分別記為A空白、A測(cè)定和A標(biāo)準(zhǔn),ΔA=A測(cè)定管-A空白管,ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次。

三、酶活計(jì)算

1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線:

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(x,μmol/mL)為橫坐標(biāo),吸光度ΔA標(biāo)(y)為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA帶入公式中計(jì)算濃度xμmol/mL)。

2、 酶活計(jì)算:

1)按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯*所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性 (U/mg prot) = x×V÷(V×Cpr) ÷T = 0.033× x÷ Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯*所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性 (U/g 質(zhì)量) = x×V樣總÷W÷T = 0.033× x÷W 

3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義:104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯*所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(U/104 cell= x×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量÷T= 0.033× x÷細(xì)胞數(shù)量

4)按血清(漿)體積計(jì)算:

酶活定義:每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯*所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PLC活性(U/mL= x÷T = 0.033× x

V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:提取中加入的試劑一體積,1mLW:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以萬計(jì);Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLT:反應(yīng)時(shí)間,30min。

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BC2410/BC2415   磷脂酶DPLD)活性檢測(cè)試劑盒

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