目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-常量法>>脂肪酸代謝系列>> BC2410-50T/48S磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
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更新時(shí)間:2024-07-08 21:46:50瀏覽次數(shù):1059評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
貨號(hào) | BC2410 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 磷脂酶D(PLD)檢測(cè) |
磷脂酶D(PLD)活性檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào):BC2410
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體0.6mL×1支 | -20℃保存 |
試劑一 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體10mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體45 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1.提取液二:試劑易揮發(fā),用完后快速擰蓋,封口膜纏口;
2.試劑三:試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中。臨用前取一支加入3mL乙醇充分溶解后取上清使用;2-8℃可以分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;
3.標(biāo)準(zhǔn)品:50umol/mL 膽*溶液,臨用前用試劑一稀釋100倍即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用(可以取10μL 50umol/mL 膽*溶液加入990μL試劑一混勻即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液 )。
產(chǎn)品說明:
磷脂酶D(Phospholipases D,PLD)催化水解磷脂酰膽*末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽*,膽*在膽*氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安*比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、超速冷凍離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。
操作步驟:一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1、 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為1:5~10的比例加入提取液,建議稱取約0.1g樣本,加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二,冰浴勻漿后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
2、 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10 000g離心5min;取全部上清于4℃、100 000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3、 血清(漿):直接測(cè)定。
二、測(cè)定步驟
1、 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定:
試劑名稱 (μL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
試劑一 | 100 | - | - |
試劑二 | 150 | 150 | 150 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 100 | - |
樣 品 | - | - | 100 |
試劑三 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻,30℃反應(yīng)30min,沸水浴10min,打開蓋子,自然冷卻5min。 | |||
試劑四 | 700 | 700 | 700 |
30℃反應(yīng)30min,測(cè)定500nm處吸光值,分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管。計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)= |
三、酶活計(jì)算
1、 按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。
PLD活性 (U/mg prot) =ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷(Cpr×V提取)÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
2、 按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義:每克組織每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位
PLD活性 (U/g 質(zhì)量) = ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷W÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
3、 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。
PLD活性(U/104 cell)= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量
4、 按血清(漿)計(jì)算:
酶活定義:每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個(gè)酶活力單位。
PLD活性(U/mL)= ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V血清(漿)÷V血清(漿)÷T = 16.7×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液濃度,500nmol/mL;V提?。杭尤氲奶崛∫后w積(提取液一+提取液二),1mL;V血清(漿):血清(漿)體積,0.1mL;W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以萬計(jì);Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
注意事項(xiàng):
1. 顯色完成后,若有沉淀,于8000g,25℃離心5min后取上清測(cè)定。
2. 吸光值不宜超過1,否則用試劑一將酶液進(jìn)行稀釋,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2420/BC2425 磷脂酶C(PLC)活性檢測(cè)試劑盒
BC2430/BC2435 磷脂酶A2(PLA2)活性檢測(cè)試劑盒
磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝 磷脂酶D(PLD)檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
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