目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>> BC2740-50T/24S苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
貨號 | BC2740 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),綜合 |
主要用途 | 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測 |
苯胺-4-羥化酶(AH)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC2740
規(guī)格:50T/24S
產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體15mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑六 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑七 | 液體30mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑一:臨用前取一瓶加入30mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;
試劑三:臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復凍融;
試劑四:臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃可保存4周;
試劑六:臨用前取一瓶加入15mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑2-8℃密封保存4周。
標準品:10nmol/mL 標準溶液
產品說明:
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當于CYP2E1亞型,CYP2E1不僅參與了藥物的代謝,而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
AH催化苯胺羥化后產生的4-氨基酚,進一步轉變?yōu)榉?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">-吲哚復合物,在630nm處有特征吸收峰;通過測定630nm吸光度增加速率,來計算AH活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、超速離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、研缽/勻漿器、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟:
粗酶液提?。蛇m當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、除去細胞核和線粒體等:稱約0.5g組織,加入4℃預冷的1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g,4℃離心30min,取上清液,轉移到超速離心管中。
2、粗制微粒體:4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質:向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、最終微粒體:向步驟3的沉淀中加0.5mL試劑二,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,置于冰上待測。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至630nm,蒸餾水調零。
試劑五置于冰浴冷卻30min。
在EP管加入下列試劑:
試劑名稱(μL) | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
粗酶液 | 250 | 250 | - | - | |
試劑三 | 500 | 500 | - | - | |
試劑四 | - | 250 | - | - | |
蒸餾水 | 250 | - | - | - | |
渦旋混勻,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋中準確水浴30min; | - | - | |||
試劑五 | 500 | 500 | - | - | |
渦旋混勻,置于冰浴中5min;11000rpm,4℃離心10min;取上清液待測; | - | - | |||
上清液 | 500 | 500 | - | - | |
標準溶液 | - | - | 500 | - | |
蒸餾水 | - | - | - | 500 | |
試劑六 | 500 | 500 | 500 | 500 | |
試劑七 | 500 | 500 | 500 | 500 | |
渦旋混勻,室溫靜置30min;取出1mL至1mL玻璃比色皿中,測定630nm下吸光度,分別記為A對照管、A測定管、A標準管;標準管只需測1-2次。每個測定管都需設一個對照管。 |
三、AH活性計算
(1)按蛋白濃度計算
活性單位定義:37℃條件下,每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。
AH活性(U/mg prot) = C標× V上總×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(Cpr×V樣)÷T
= 2×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質量計算
活性單位定義:37℃條件下,每克組織每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。
AH活性(U /g 質量) = C標×V上總×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(V樣×W÷V試劑二)÷T
=(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標:10nmol/mL;V上總:反應體系中上清總體積,1.5mL;Cpr:粗酶液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定;V樣:反應體系中加入的樣本體積,0.25mL;W:樣本質量,g;V試劑二:提取中加入的試劑二體積,0.5mL;T:催化反應時間,30min。
注意事項:
1、如果測定吸光值A>1.2或ΔA>0.8,建議稀釋樣本后再測定,計算公式中乘以稀釋倍數。
2、如果測定吸光值較低或接近空白OD值,建議增加樣本量后再進行測定,注意同步修改計算公式。
3、粗酶液提取后需在當日完成測定。
苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒 苯胺-4羥化酶(AH)活性檢測試劑盒