目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>信號系列>> BC1475-100T/96S一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號 | BC1475 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 一氧化氮(NO)含量檢測 |
一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒說明書(酶法測定總NO)
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號:BC1475
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑四 | 液體1.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 液體25μL×1支 | 2-8℃保存 |
顯色液A液 | 2-8℃保存 | |
顯色液B液 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
澄清劑 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前加入1.8 mL蒸餾水,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;
2、 試劑二:臨用前加入1mL蒸餾水,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;
3、 試劑二工作液:臨用前根據(jù)樣本量按試劑二:蒸餾水=10μL:590μL(60T)的比例配制,當(dāng)天用完;
4、 試劑三:臨用前加入550μL蒸餾水溶解,-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;
5、 試劑五:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑五:蒸餾水=5μL:225μL(23T)的比例配制試劑五溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配;
6、 顯色液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照顯色液A液:顯色液B液=1:1充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用;
7、 澄清劑:臨用前加入6mL蒸餾水,可震蕩或50℃加熱促進(jìn)溶解。此溶液為飽和溶液,取上清使用即可。2-8℃可保存12周;
8、 標(biāo)準(zhǔn)液:10μmol/mL亞硝*。臨用前取20μL 10μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,加入380μL蒸餾水,配制成0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,再取0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液50μL和蒸餾水450 μL混合配制成0.05μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
產(chǎn)品說明:
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一種極不穩(wěn)定的生物自由基,分子小,結(jié)構(gòu)簡單,常溫下為氣體,微溶于水,具有脂溶性,可快速透過生物膜擴散,作為一種新型的生物信使分子,在細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮傳遞信號的作用。其廣泛分布于生物體內(nèi)各組織中,特別是神經(jīng)組織中。在機體神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中也起著十分重要的作用。
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2-和NO3-,本法利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原成NO2-,在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計算NO含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 組織樣本:按質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.2g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃,12000rpm,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。
2. 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液體積(mL)500~1000 : 1的比例加入提取液(建議1000萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1.0mL提取液),冰浴超聲破碎細(xì)菌/細(xì)胞(功率200w,超聲3s,間隔7s,總時間5min),然后于4℃,12000rpm,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。
3. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
二、測定步驟
1.可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2.操作表:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 60 | - | - |
0.05μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | - | 60 | - |
蒸餾水 | - | 40 | 100 |
試劑一 | 5 | - | - |
試劑二工作液 | 10 | - | - |
試劑三 | 5 | - | - |
混勻,37℃反應(yīng)120min | - | - | |
試劑四 | 10 | - | - |
試劑五 | 10 | - | - |
混勻,37℃反應(yīng)30min | - | - | |
顯色液 | 100 | 100 | 100 |
混勻,常溫靜置10min,于550nm處測定各管吸光值,分別記為A測定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。 |
三、NO含量計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
NO含量(μmol/mg prot)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×Cpr) = 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
2. 按樣本質(zhì)量計算
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(W×V樣÷V樣總) = 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算
NO含量(μmol/104 cell)=ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×N÷V樣總) = 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
4. 按液體體積計算
NO含量(μmol/mL)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷V樣= 0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05μmol/mL;V樣:加入樣本體積,0.06mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g ;N:細(xì)菌/細(xì)胞總數(shù),以104計。
注意事項:
1、 如果樣本勻漿液離心后上清仍舊渾濁,可直接進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)后在200μL反應(yīng)液中加入50μL澄清劑,混勻后靜置5min,離心后取200μL上清測定,這種情況下需將空白管和標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行相同處理。
2、 如果?A測定小于0.005或測定管吸光值接近空白管,可以增加樣本量后再進(jìn)行測定;如果?A測定大于0.6,建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。
3、 如果樣本上清有顏色(在550nm下有吸收峰),則需要補測樣本的對照管,即將顯色液用相同體積的蒸餾水代替。在550 nm下測定吸光值A,分別記為 A標(biāo)準(zhǔn)、A測定、A空白、A對照,計算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白,ΔA測定=A測定-A對照。此時試劑盒規(guī)格為100T/48S。
實驗實例:
1. 取0.107g玉蘭葉片樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.172-0.045=0.127,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.526-0.045=0.481,按樣本質(zhì)量計算得:
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W = 0.05×0.127÷0.481÷0.107=0.123 μmol/g 質(zhì)量。
2. 取0.0868g小鼠心臟樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.187-0.045=0.142,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.526-0.045=0.481,按樣本質(zhì)量計算得:
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W = 0.05×0.142÷0.481÷0.0868=0.170 μmol/g 質(zhì)量。
3. 取60μL牛血清樣本,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.326-0.045=0.281,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.526-0.045=0.481,按液體體積計算得:
NO含量(μmol/mL)=0.05×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) = 0.05×0.281÷0.481=0.029 μmol/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
[1] Peng X, Zhu L, Guo J, et al. Enhancing biocompatibility and neuronal anti-inflammatory activity of polymyxin B through conjugation with gellan gum[J]. International journal of biological macromolecules, 2020, 147: 734-740.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0080/BC0085 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
BC1480/BC1485 水土中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒
BC1490/BC1495 食品中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒
一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號 一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號
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