West Pico ECL超敏發(fā)光液
貨號：PE0020
規(guī)格：2*12.5ml/2*50ml

英文別名：West Pico ECL Substrate

     West Pico ECL超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico ECl超敏發(fā)光液是目前靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑：
(1) 具有靈敏度和高信噪比，可檢測10～100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
(3) 發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。

2. 用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。

3. 使用方法:
    (1)執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
    (2)Western Blot后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
    (3)用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
    (4)用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
    (5)打開X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
    (6)暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

4. 儲存：4  oC密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性：無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

6. 注意事項(xiàng)：
    (1)步驟1～5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
    (2)長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
    (3)發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
    (4)由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
    (5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
    (6)使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可確定膠片上條帶的位置和大小。
    (7)NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%

 
參考文獻(xiàn)：
《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響因子:2.569 PMID:29575809