Na⁺ K⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
貨號(hào)：BC0065
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加1 mL蒸餾水溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃分裝保存一周。

2. 試劑六：用時(shí)加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

3. 試劑七：用時(shí)加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液。將標(biāo)準(zhǔn)品20倍稀釋，即取 0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)品加1.9 mL蒸餾水充分混勻，配成0.5 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5. 定磷劑的配制：按H₂O:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1（體積比）的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說(shuō)明：
Na⁺K⁺- ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。
Na⁺K⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1、由于每一個(gè)樣都必須做對(duì)照，本試劑盒100管保證測(cè) 48份Na⁺K⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格無(wú)磷。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g小鼠心臟加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算A測(cè)定=0.741，A對(duì)照=0.509，A標(biāo)準(zhǔn)=0.280，A空白=0.043，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g 質(zhì)量)=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W=73.42 U/g質(zhì)量。

1. 取0.1g稗草加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算A測(cè)定=0.275，A對(duì)照=0.239，A標(biāo)準(zhǔn)=0.280，A空白=0.043，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g質(zhì)量)=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W=11.39 U/g質(zhì)量。

1. 取100μL小鼠血漿檢測(cè)，用96孔板測(cè)得A測(cè)定=1.114，A對(duì)照=1.054，A標(biāo)準(zhǔn)=0.280，A空白=0.043，按液體體積計(jì)算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力（U/mL）=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）=1.90 U/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Fangzhou Chen,Ying Zhao,Huizhao Chen,et aL. MicroRNA-98 reduces amyLoid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondriaL dysfunction through the Notch signaLing pathway via HEY2 in ALzheimer's disease mice. InternationaL JournaL of MoLecuLar Medicine. October 2018;(IF2.928)

[2] Wanxiu Cao,Jing Li,Yaoxian Chin,et aL. Transcriptomic anaLysis reveaLs effects of fucoxanthin on intestinal gLucose transport. JournaL of FunctionaL Foods. October 2018;(IF3.197)
[3] Li M, Jiang C, Zhang Y, et al. Activities of Amphioxus GH-like protein in osmoregulation: insight into origin of vertebrate GH family[J]. International journal of endocrinology, 2017, 2017.
參考文獻(xiàn)：
[1] Luo L G, MacLean D B. Effects of thyroid hormone on food intake, hypothalamic Na/K ATPase activity and ATP content[J]. Brain research, 2003, 973(2): 233-239.
[2] Cornelius F. Modulation of Na, K-ATPase and Na-ATPase activity by phospholipids and cholesterol. I. Steady-state kinetics[J]. Biochemistry, 2001, 40(30): 8842-8851.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0960/BC0965 Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒
BC0300/BC0305 ATP含量檢測(cè)試劑盒

Na+k+ ——ATP酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 Na+k+ ——ATP酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法