果糖激酶（FRK）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

微量法

貨號(hào)：BC5925

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：臨用前將粉劑一溶于提取液中；該試劑為懸濁液，使用前搖勻即可，2-8℃保存12周；

1. 試劑一：試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中。臨用前加入2.667mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

2. 試劑二：試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中。臨用前加入3.03mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；

3. 試劑三：試劑放于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃瓶中，臨用前加入6mL蒸餾水溶解，溶解后的試劑2-8℃分裝保存4周；

4. 試劑五工作液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑五：蒸餾水=8μL:1000μL（共1008μL，約100T）的比例配制，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；為了延長(zhǎng)使用時(shí)間，此產(chǎn)品多給1支。

5. 試劑六：臨用前取一支試劑六加入1mL蒸餾水，充分溶解。溶解后的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。（該試劑為凍干試劑，可能存在不同瓶間肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實(shí)際質(zhì)量相同）

產(chǎn)品說(shuō)明：

果糖激酶（Fructokinase，F(xiàn)RK，EC 2.7.1.4）是催化果糖磷酸化的主要酶。果糖激酶可以作為植物的己糖感受器和信號(hào)分子，通過(guò)影響植物的生長(zhǎng)周期來(lái)調(diào)控植物的代謝和生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)程，果糖磷酸化對(duì)于維持淀粉生物合成方向具有重要意義。

FRK催化果糖合成6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADH，NADH在340nm有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請(qǐng)見“產(chǎn)品資料"文件

注意事項(xiàng)：

1. 如果?A小于0.005，可以增加樣本量或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間再進(jìn)行測(cè)定；如果?A測(cè)定大于0.6或A1測(cè)定小于A1空白，建議將樣本稀釋或者縮短反應(yīng)時(shí)間再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1023g土豆組織樣本，加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.137-0.080=0.057，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA測(cè)定- ΔA空白=0.057。按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

FRK活性（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W = 179.157U/g 質(zhì)量。

2. 取0.06g酵母粉，加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿，離心后取上清，按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.705-0.202=0.503，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0，ΔA=ΔA測(cè)定- ΔA空白=0.503。按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

FRK活性（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W =2695.58U/g 質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1] Giroix M H, Jijakli H, Courtois P, et al.Fructokinase activity in rat liver, ileum, parotid gland, pancreas, pancreatic islet, B and non-B islet cell homogenates.[J].International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(3):517-522.

[2] Kurt, Bergbauer, Ralf, et al. Studies on Fructose Metabolism in Cultured Astroglial Cells and Control Hepatocytes: Lack of Fructokinase Activity and Imrrunoreactivity in Astrocytes[J].Developmental Neuroscience, 2009, 18(5-6):371-379.

[3] Schaffer A A, Petreikov M. Inhibition of fructokinase and sucrose synthase by cytosolic levels of fructose in young tomato fruit undergoing transient starch synthesis[J].Physiologia Plantarum, 2010, 101(4):800-806.

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