服務(wù)項(xiàng)目 | 終端報(bào)價(jià) | 說明 | 實(shí)驗(yàn)周期 |
SYBR Green染料法（單孔） | 80元/例/基因 | 包含引物設(shè)計(jì)合成、提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增.內(nèi)參免費(fèi)（多樣本多基因可優(yōu)惠6-8折） | 1至2周內(nèi) |
SYBR Green染料法（兩重復(fù)） | 100元/例/基因 | ||
SYBR Green染料法（三重復(fù)） | 120元/例/基因 | ||
DNA提取 | 30元/樣本 | 包含濃度測(cè)定 | 1周內(nèi) |
RNA提取 | 35元/樣本 | ||
miRNA定量檢測(cè)（單孔） | 90元/例/基因 | 包含引物設(shè)計(jì)合成、提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增.內(nèi)參免費(fèi) | 1至2周內(nèi) |
lcnRNA定量檢測(cè)（單孔） | 90元/例/基因 | ||
siRNA合成 | 1000元/條 | 包含siRN及NC各一條 | 2至3周內(nèi) |
Taqman探針 | 1200元/條 | 包含探針一條及上下游引物一對(duì) | 1至2周內(nèi) |
SNP檢測(cè) | 100元/例/位點(diǎn) | 包含DNA提取、擴(kuò)增、測(cè)序 | 2至3周內(nèi) |
實(shí)驗(yàn)意義
熒光定量PCR (Realtime fluorescence quantitative PCR, qPCR)也稱作實(shí)時(shí)熒光定量PCR。就是在PCR的擴(kuò)增過程中，通過熒光的信號(hào)，對(duì)PCR的進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)的定性、定量檢測(cè)， 后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)初始模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測(cè)方式有SYBR Green染料法和Taqman探針法兩種方式。
探針法與染料法的優(yōu)缺點(diǎn)
1.探針法通過探針可以增加反應(yīng)收集信號(hào)的特異性，只有探針結(jié)合的片段上發(fā)生擴(kuò)增才能收集到信號(hào)，能夠用多重體系反應(yīng)的方法，能夠預(yù)測(cè)和提前進(jìn)行反應(yīng)條件的優(yōu)化,缺點(diǎn)是要合成探針，成本高，周期長(zhǎng)。
2.染料法經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，可以做溶解曲線，分析全部PCR產(chǎn)物的TM值，缺點(diǎn)就是特異性沒有探針法好。
實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集及保存方法：
1：病理標(biāo)本收集及保存：
1）冰凍切片：取下適當(dāng)?shù)慕M織塊放于液氮保存；
2）石蠟切片：取下適當(dāng)?shù)慕M織塊放于4%多聚甲醛保存；
3）細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定30min，換PBS浸沒4℃保存。
2：分子生物學(xué)標(biāo)本收集及保存：
1）新鮮組織：切割標(biāo)本后放于液氮或者-80℃冰箱保存；
2）石蠟標(biāo)本：常溫保存；
3）全血標(biāo)本：取適量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管；
4）體液標(biāo)本：高速離心取沉淀；
5）細(xì)胞標(biāo)本：細(xì)胞加TRizol裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。
3：蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集及保存：
1）新鮮組織：切割標(biāo)本后放于液氮或者-80℃冰箱保存；
2）全血標(biāo)本：取適量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管；
3）細(xì)胞標(biāo)本：細(xì)胞加細(xì)胞裂解液充分裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。
4：ELISA、放免、生化實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集及保存：
1）血清（血漿）樣本：取全血加入促凝管（抗凝管），2500轉(zhuǎn)離心20分鐘左右，收集上清，液氮或者-80℃冰箱保存；
2）尿液樣本：樣本2500轉(zhuǎn)離心20分鐘左右，液氮或者-80℃冰箱保存；胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液參照此實(shí)行；
3）細(xì)胞樣本：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，樣本2500轉(zhuǎn)離心20分鐘左右，液氮或者-80℃冰箱保存；檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS稀釋細(xì)胞懸液，通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，2500轉(zhuǎn)離心20分鐘左右，收集上清同上；
4）組織樣本：切割標(biāo)本后，稱取重量，用液氮或者-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?/span>。
5：代謝組學(xué)標(biāo)本收集：
1）尿液樣本：樣本2500轉(zhuǎn)離心20分鐘左右，液氮或者-80℃冰箱保存；胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液等參照此實(shí)行；
2）組織樣本切割標(biāo)本后，稱取重量，用液氮或者-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?/span>；
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