非接觸式亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng)

mIRage工作原理：

• 可調(diào)的脈沖式中紅外激光匯聚于樣品表面，并同時發(fā)射與紅外激光共線性的532 nm的可見探測激光；
• 當IR吸收引發(fā)樣品材料表面的光熱效應(yīng)，并被可見的探測激光所檢測到；
• 反射后的可見探測激光返回探測器，IR信號被提取出來；

• 通過額外地檢測樣品表面返回的拉曼信號，可以實現(xiàn)同時的拉曼測量。

O-PTIR克服了傳統(tǒng)紅外光譜的諸多不足： 

• 空間分辨率受限于紅外光光波長，只有10-20 μm
• 透射模式需要復(fù)雜的樣品準備過程,且只限于薄片樣品

• 無傳統(tǒng)ATR模式下的散射像差和接觸污染

O-PTIR的勢之處在于: 

• 亞微米空間分辨的IR光譜和成像（~500 nm），且不依賴于IR波長
• 與透射模式相媲美的反射模式下的圖譜效果
• 非接觸測量模式——使用簡單快捷，無交叉污染風險
• 很少或無需樣品制備過程 （無需薄片）, 可測試厚樣品
• 可透射模式下觀察液體樣品

• 實現(xiàn)同時同地相同分辨率的IR和Raman測試，無熒光風險

mIRage應(yīng)用域：

故障和缺陷分析

聚合物：多層薄膜，相位分布

生命科學(xué)：活細胞、組織、骨骼

微塑料：顆粒、纖維

mIRage 技術(shù)參數(shù)： 

Customizable to 3000-2800 cm^-1 + 1800-1000cm^-1

Customizable to 2250-1950 cm^-1 + 1800-1000cm^-1

應(yīng)用案例

■  偏振紅外光譜助力膠原蛋白的分子取向研究

       在過去的十年里，紅外（IR）光譜已被廣泛應(yīng)用于哺乳動物組織中的膠原蛋白研究。對有序膠原蛋白光譜的更好理解將有助于評估受損膠原蛋白和疤痕組織等疾病。因此，用偏振紅外光研究膠原蛋白（I型膠原和II型膠原）的層狀結(jié)構(gòu)和徑向?qū)ΨQ性逐漸成為研究熱點。

       近期，在Kathleen M. Gough等人的研究中^[1]，作者采用基于光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)的PSC非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng) mIRage對樣品?500 nm單點區(qū)域收集振動光譜，如圖1所示。該光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)的工作原理是光熱檢測，其中紅外量子聯(lián)激光器（QCL）激發(fā)樣品在1800–800 cm^-1光譜范圍內(nèi)的分子振動。產(chǎn)生的光熱效應(yīng)通過短波長探測激光器檢測。圖1A-B中的光譜表明，固有的激光偏振所獲得的高對比度所產(chǎn)生的光譜與使用FTIR焦平面陣列和偏振器組合進行的光譜測試近乎致。并且對于安裝在玻璃顯微鏡的不同載玻片，樣品均獲得了具有良好SNR的高質(zhì)量光譜。

圖1. 從CaF₂窗口用O-PTIR測試控制肌腱原纖維獲得的光譜。用平行于激光偏振的原纖維獲得的頂光譜（紅色）；藍色是垂直方向上的光譜。右側(cè)是在垂直方向基于1655 cm^-1的單波長圖像。正方形表示光譜采集位置。比例尺= 1 μm。

       光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)可以通過在載物臺上輕易地旋轉(zhuǎn)樣品來測試平行和垂直于紅外激光偏振方向的光譜。并用光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)在幾個單頻率下對原纖維成像，以獲得表觀物理寬度的確定性估計。如圖1右側(cè)所示，在垂直方向上， 1655 cm^-1處記錄的單波長圖像的紅黃帶表明該原纖維的寬度不超過500 nm。該尺寸將目標物標定為真正的原纖維，并且可與紅外s-SNOM實驗中檢測到的300 nm原纖維相當。光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）技術(shù)與nano-FTIR的測試結(jié)果相互印證，反映了“原纖維”寬度的標準范圍。此外作者觀察到，來自原纖維的酰胺I和II譜帶比完整肌腱的窄，并且相對強度和譜帶形狀都發(fā)生了變化。這些光譜反映出在偏振紅外光下正常I型膠原纖維的更多有用信息，并可作為研究膠原組織的基準。

       與基于焦平面陣列檢測器的偏振遠場傅立葉變換紅外（FF-FTIR）光譜相比，光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）具有更高的空間分辨率，且可提供單波長光譜。使用FF-FTIR FPA探測往往包括其他非膠原材料。同時，光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）還可以提供偏振平行于原纖維取向的原纖維光譜。這也是光學(xué)光熱紅外（O-PTIR）和納米FTIR光譜對直徑為100~500 nm的膠原原纖維給出證實性和互補性結(jié)果的*證明。綜上所述，這些結(jié)果為進步研究生物樣品中的膠原蛋白提供了廣闊的基礎(chǔ)。

參考文獻：

[1]. Gorkem Bakir, Benoit E. Girouard,  Richard Wiens, Stefan Mastel, Eoghan Dillon, Mustafa Kansiz, Kathleen M. Gough, Molecules 2020, 25, 4295; doi:10.3390/molecules25184295.

■  光熱紅外顯微技術(shù)*應(yīng)用于刑偵域指紋中易爆物的檢測

       傳統(tǒng)的可視化指紋檢測手段，如撲粉，茚三酮熏蒸，真空金屬沉積等，盡管可以重建指紋圖案，但其同時可能對些指紋脊狀突起中含有的化學(xué)物質(zhì)造成破壞。近年來，許多技術(shù)被用于指紋中痕量外源物質(zhì)的分析鑒定，如解吸電噴霧電離質(zhì)譜(DESI-MS)，液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)，但通常需要額外的溶劑噴霧處理，且空間分辨率不足（~150 μm），或者分析過程會對指紋造成破壞。傅里葉變換紅外(FTIR)光譜顯微鏡，可以探測樣品中分子間化學(xué)鍵的固有分子振動，并提供豐富的化學(xué)信息, 已成為種快速、無需標記、無損的樣品表征方法，被廣泛應(yīng)用于包括刑偵在內(nèi)的眾多域。FTIR透射模式測試通常選用紅外光透明的材料，而反射模式則選用硅片，聚酯薄膜或鋁覆蓋的玻璃基底，但兩者在指紋分析上多局限于收集在選定波數(shù)下指紋中組分物質(zhì)的二維分布信息。另外對于那些沉積在既不透明也不反射紅外的基底上的樣品，衰減全反射法（Attenuated total reflectance，ATR）成為選擇，但ATR通常不是法醫(yī)鑒定的種理想方法，因為ATR要求被分析的樣品和ATR晶體緊密接觸，往往會導(dǎo)致樣品變形甚至后破壞剩余的證據(jù)。

       基于以上考慮，新加坡國立大學(xué)同步輻射光源線站的科學(xué)家們和新加坡刑事調(diào)查局刑偵部門共同合作開發(fā)出了種新的紅外檢測手段，即使用基于新型光熱紅外（Optical- Photothermal InfraRed，O-PTIR）技術(shù)的非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng)mIRage來分析指紋中含有的痕量易爆物微粒，該技術(shù)帶來了系列的勢，如亞微米的紅外光譜和成像分辨率，易操作的遠場、非接觸顯微鏡工作模式和明顯高于FTIR光譜顯微鏡的靈敏度。

作者認為O-PTIR技術(shù)是種分析具有挑戰(zhàn)性樣品的理想手段，如隱藏的指紋，提供隱藏在大量外源物質(zhì)中的微小(亞微米)粒子的化學(xué)信息（如易爆物）且不需要復(fù)雜的樣品制備過程。這些信息可以通過單波數(shù)紅外成像和亞微米空間分辨率的紅外光譜獲得，后者使用目前的FTIR光譜顯微鏡是無法做到的（分辨率受限于紅外波長，約10-20 μm）。另外，該分析手段非常簡單快捷，無破壞性，且不需要基于接觸的方法（例如ATR光譜技術(shù)），使得樣品的完整性被*的保持。別指出的是，該技術(shù)的非破壞性非常重要，尤其是在法醫(yī)域，因為它可以允許同時使用其他技術(shù)對相同樣本進行互補和比對分析，并作為法律證據(jù)。此外，隨著技術(shù)的發(fā)展，O-PTIR現(xiàn)在可以與拉曼顯微鏡相結(jié)合，以提供真正的亞微米同步的紅外拉曼測試，使得在個儀器上通過次測量即可進行互補和驗證分析。

■  亞微米空間分辨同步IR + Raman光譜成像分析 PLA/PHA生物微塑料薄片

       來源于石油中的塑料產(chǎn)品已經(jīng)成為現(xiàn)代生活不可分割的部分，它們性能異，用途廣泛且相對便宜，但同時也引發(fā)了人們對于塑料垃圾在環(huán)境中累積問題的擔憂，迫使我們盡快采取行動探索替代傳統(tǒng)塑料的新型材料。生物塑料, 如聚乳酸(PLA)和聚羥基烷酸酯(PHA)等均來源于天然資源（如糖，植物油等），它們在適當條件下可發(fā)生生物降解，因此其制成的產(chǎn)品即使不小心泄漏到環(huán)境中，也不會像傳統(tǒng)塑料樣長期殘留在土壤和水道中，而是終回歸自然，安全而又環(huán)保。

       雖然典型的PLA和PHA在分子層面上基本不混溶，但得益于其異的相容性，它們可以以不同比例形成復(fù)合材料，創(chuàng)造出許多性質(zhì)迥異的功能材料。為了更好地理解這兩種材料在微觀上的相互作用，美國拉華大學(xué)Isao Noda教授課題組與Photothermal Spectroscopy Corp公司合作，用基于光學(xué)光熱紅外技術(shù)（O-PTIR）的新代非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng)mIRage對PLA和PHA的復(fù)合薄片進行紅外拉曼同步成像分析，探究了這兩種材料結(jié)合的方式和內(nèi)在機理。

PHA/PLA羰基伸縮振動區(qū)域二維同步(A)和異步(B)相關(guān)光譜（2D-COS）分析以及交界區(qū)域同步O-PTIR紅外和拉曼光譜分析（左為紅外，右為拉曼）。

       O-PTIR作為種新型的光譜技術(shù)，具有傳統(tǒng)FTIR顯微鏡不可比擬的點，并克服了許多限制。，O-PTIR可以提供空間分辨率約為500 nm的紅外譜圖，遠遠超過了典型的紅外衍射限空間分辨率，且不依賴于入射紅外波長。更重要的是，它能夠以反射/非接觸(遠場)工作模式簡單快速的生成高質(zhì)量的類似于FTIR的譜圖，從而避免了制備樣本薄切片的必要，且光譜與商用FTIR數(shù)據(jù)庫搜索*兼容和可譯。另外，即使樣品中包含易產(chǎn)生熒光干擾的組分（壓制拉曼信號或造成其飽和），O-PTIR的可調(diào)制信號收集性也確保它*不受任何熒光的影響。IR和Raman在O-PTIR方法的結(jié)合下，可以充分用這兩種互補性技術(shù)的勢，實現(xiàn)同步的紅外吸收和拉曼散射測量，并相互印證。

參考文獻：

[1] Two-dimensional correlation analysis of highly spatially resolved simultaneous IR and Raman spectral imaging of bioplastics composite using optical photothermal Infrared and Raman spectroscopy，Journal of Molecular Structure， DOI: 10.1016/j.molstruc.2020.128045.

■  非接觸式亞微米O-PTIR光譜成像技術(shù)研究Ruddlesden-Popper混合鈣鈦礦邊緣的形成

       低能量邊緣光致發(fā)光的研究，對提高Ruddlesden-Popper鈣鈦太陽能電池效率有著十分重要的影響和意義。在本篇研究中，電子科技大學(xué)王志明教授課題組與Photothermal Spectroscopy Corp公司合作，使用O-PTIR技術(shù)及新代的非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng)mIRage研究MAPbBr₃在(BA)₂(MA)₂Pb₃Br板邊緣分布情況。本研究使用O-PTIR技術(shù)探測具有以下勢：(BA)₂(MA)₂Pb₃Br₁₀和MAPbBr₃之間由于缺少BA，因此其紅外光譜具備顯著的差異；其次，這種非接觸式探測能夠有效避免樣品高度，探針污染所帶來的問題；另外，無論是BA缺陷，還是BA對MA的比例已有使用FTIR光譜研究的報道，具備良好的基礎(chǔ)。

圖1  O-PTIR觀測邊緣的MAPbBr₃的紅外光譜信息。(a)(BA)₂(MA)_n-1 b_n br_3n+1(n = 1，2，3，∞)鈣鈦礦的紅外光譜；（b-c）(BA)₂(MA)₂Pb₃Br₁₀和MAPbBr₃的中MA⁺分子在1480 cm^-1 (b)和BA⁺分子 1580 cm^-1 (c)的圖譜；(d) (BA)₂(MA)₂Pb₃Br₁₀的PL圖像；(e)在(d)中所示的中心區(qū)域和邊緣的紅外光譜圖

       通過O-PTIR的測量（圖1），能夠觀測到隨著BA的含量降低，~1580 cm^-1處的峰的相對強度減小，峰值伴隨著向1585 cm^-1的峰值偏移。這主要是由于(BA)₂(MA)₂Pb₃Br₁₀在1580 cm^-1附近有兩個涉及NH₃振動的紅外吸收帶:個在1575 cm^-1處(BA⁺)，另個在1585 cm^-1處(MA+)。當BA含量降低時，1575 cm^-1處的帶強度降低，導(dǎo)致峰值強度在約1580 cm^-1處降低，并伴隨向1585 cm^-1偏移。在測試中觀測到的另外個現(xiàn)象為~1480 cm^-1與~1580 cm^-1的相對強度比增大，因為1478 cm^-1的振動(CH₃振動)僅與MA⁺相關(guān)，因此~1480 cm^-1的強度沒有變化，而1580 cm^-1卻由于BA含量降低而降低，導(dǎo)致比值的降低。

■  非接觸式亞微米O-PTIR光譜成像技術(shù)研究高內(nèi)相乳液聚合演變過程

       在高內(nèi)相乳液(HIPE)中，初始離散單元在聚合過程中或之后轉(zhuǎn)變成由窗口高度互聯(lián)聚合體的時間和方式，直是個有爭議的問題。2D O-PTIR(optical photothermal infrared)新表面成像技術(shù)為探索這個polyHIPE的窗口形成機理提供了機會，只要檢測目標區(qū)域的大小相對于分辨率來說足夠大。2D PTIR技術(shù)基于以下工作原理：束紅外激光聚焦在樣品表面;被吸收的紅外光使樣品升溫，誘導(dǎo)光熱響應(yīng);這種本征的光熱響應(yīng)被束可見光所檢測；因此可與FTIR透射模式質(zhì)量相媲美的圖譜被使用反射模式所得到。該技術(shù)有四大勢：使用可見光為檢測光，可以將分辨率提高到 ~ 500 nm；非接觸式的光學(xué)顯微鏡；分辨率不依賴于紅外光波長；不會產(chǎn)生彌散的偽影。同濟大學(xué)萬德成教授課題組與Photothermal Spectroscopy Corp公司合作，用光學(xué)光熱紅外技術(shù)（O-PTIR）技術(shù)及新代的非接觸亞微米分辨紅外拉曼同步測量系統(tǒng)mIRage（圖1）對polyHIPE的聚合體進行了紅外光譜和成像分析，探究其演變過程及形成機理。

圖1. A) 3% 表面活性劑用量誘導(dǎo)的polyHIPE選取區(qū)域的光學(xué)照片, B) 相應(yīng)的mIRage 2D O-PTIR圖像。C) 插圖為典型的選定區(qū)域附近的局部表面形貌(通過SEM)，D) 插圖為立方狀樣品的光學(xué)照片(≈5×5×5 cm³)。(B)圖條件:紅色代表強烈的反應(yīng)，綠色代表幾乎沒有反應(yīng)，而黃色代表對1492 cm^-1處的激光束的中等反應(yīng)。

圖2. 在1600 (綠色)和1492 cm ^-1(紅色)激光束照射下的多聚體表面的mIRage 2D O-PTIR圖像。B) 系列的FTIR光譜提取采樣點(箭頭尾)。每個采樣點的高度比為1600/1492 cm^-1，如(C)所示，相鄰的采樣點為250 nm

■   科學(xué)家借助mIRage*成功直觀揭示神經(jīng)元中淀粉樣蛋白聚集機理

       老年神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默癥(AD)、肌萎性側(cè)索硬化癥、Ⅱ型糖尿病等，目前困擾著*大約5億人，且這個數(shù)字仍在不斷迅速增長。尤其是阿爾茲海默癥（占70%以上），目前仍未有行之有效的診斷方法，因此無法得到有效的治療或預(yù)防。盡管當代病理學(xué)研究已經(jīng)證實這種病理變化與具有神經(jīng)毒性的β淀粉樣蛋白質(zhì)的聚集有關(guān)，但其在神經(jīng)元或腦組織中的聚集機制目前尚不清楚?，F(xiàn)有的方法, 如電子顯微鏡、免疫電子顯微鏡、共聚焦熒光顯微鏡、超分辨顯微鏡，通常都需要對樣品進行化學(xué)加工（標記染色等）,可能會對淀粉樣蛋白結(jié)構(gòu)本身造成影響。而非標記方法，如表面增強拉曼光譜（SERS）和傅里葉變換紅外光譜（FTIR）, 前者受限于亞細胞水平上的低信噪比、自發(fā)熒光及不可逆的光損傷，后者其空間分辨率受限于紅外光波長（≈5–10 μm），且光譜可解譯性和準確性受到彈性細胞光散射所產(chǎn)生的米氏散射效應(yīng)(Mie scattering effects)的嚴重影響，使得直接在亞微米尺度上研究淀粉樣蛋白質(zhì)在神經(jīng)元內(nèi)的聚集行為十分困難。

       近日，瑞典隆德大學(xué)的Klementieva教授團隊與美國PSC公司的Mustafa Kansiz博士合作，使用全新非接觸式亞微米分辨紅外測量系統(tǒng)，在亞微米尺度上研究了淀粉樣蛋白沿著神經(jīng)突直到樹突棘的聚集行為（圖1B和C），這是以往的實驗技術(shù)手段所不可能實現(xiàn)的。該技術(shù)是在非接觸模式下工作，不會對神經(jīng)元造成損傷，這在研究脆弱或粘性的物質(zhì)時顯得尤為重要。另外，該技術(shù)還能獲得亞微米尺度的紅外光譜，且不含由于背景失真或米氏散射造成的散射偽影。技術(shù)進步表明，全新的非接觸式亞微米分辨紅外測量系統(tǒng)mIRage現(xiàn)在可以用來做活細胞成像,并保持相同的亞微米空間分辨率。在這種情況下，全新的非接觸式亞微米分辨紅外測量系統(tǒng)有望在β片層結(jié)構(gòu)在活神經(jīng)元的突觸附近的化學(xué)成像中發(fā)揮關(guān)鍵作用，并提供個新的機會來研究神經(jīng)毒性淀粉樣蛋白如何從個患病的神經(jīng)元傳播到個健康的神經(jīng)元，揭示阿爾茨海默癥的形成和發(fā)展機制。該工作發(fā)表在2020年的Advanced Sciences上（DOI: 10.1002/advs.201903004）。

圖1. (A) 美國PSC公司非接觸式亞微米分辨紅外測量系統(tǒng)mIRage實物圖；（B）亞微米紅外成像示意圖：神經(jīng)元樹突的AFM形貌圖,其中神經(jīng)元直接在CaF₂基底下生長。mIRage采用兩束共線性光束: 532 nm可見(綠色)提取光束和脈沖紅外(紅色)探測光束，樣品的光熱響應(yīng)被檢測為樣品由于對脈沖紅外光束的吸收而引發(fā)的綠色光部分強度的損失，使紅外檢測的空間分辨率提高到≈500 nm. (C) 小鼠大腦皮層初神經(jīng)元, 在CamKII促進下表達為tdTomato熒光蛋白，使得神經(jīng)元結(jié)構(gòu)填滿紅色，圖片標尺為20 μm。(D) 圖C區(qū)域放大圖片，箭頭指示樹突上的神經(jīng)元刺。

更多詳細信息請參考：https://qd-china.com/zh/news/detail/2003031055084

參考文獻：Super‐Resolution Infrared Imaging of Polymorphic Amyloid Aggregates Directly in Neurons.

測試數(shù)據(jù)

1、多層薄膜

2、高分子

3、生命科學(xué) 

4、醫(yī)藥域

左：PLGA高分子和Dexamethasone藥物分子的混合物表面的光學(xué)照片
中：在1760 cm^-1 出的高光譜圖像，顯示了 PLGA在混合物中的分布，圖像尺寸40 μm * 40 μm 

右：在1666 cm^-1 出的高光譜圖像，顯示了 Dexamethasone在混合物中的分布，圖像尺寸40 μm *40 μm

5、法醫(yī)鑒定

左：800 nm纖維的光學(xué)照片

右：納米纖維不同區(qū)域的O-PTIR圖譜

6、其他域

•  故障分析和缺陷

•  微電子污染

•  食品加工

•  地質(zhì)學(xué) 

•  考古和文物鑒定

發(fā)表文章

[1] Depth-resolved mid-infrared photothermal imaging of living cells and organisms with submicrometer spatial resolution, Ji-Xin Cheng et al., Sci. Adv. 2016, 2, e1600521.

[2] Mid-Infrared Photothermal Imaging of Active Pharmaceutical Ingredients at Submicrometer Spatial Resolution, Ji-Xin Cheng et al., Anal. Chem. 2017, 89, 4863-4867.

[3] Label-Free Super-Resolution Microscopy. Springer, Biological and Medical Physics, Biomedical Engineering.

[4] Advances in Infrared Microspectroscopy and Mapping Molecular Chemical Composition at Submicrometer Spatial Resolution, Spectroscopy 2018.

[5] Evolution of a Radical-Triggered Polymerizing High Internal Phase Emulsion into an Open-Cellular Monolith, Macromolecular Chemistry and Physics, 2019.

[6] A Global Perspective on Microplastics, Journal of Geophysical Research: Ocean, 2019.

[7] Super-Resolution Infrared Imaging of Polymorphic Amyloid Aggregates Directly in Neurons (Front Cover), Advanced Science, 2020.

[8] Self-formed 2D/3D Heterostructure on the Edge of 2D Ruddlesden-Popper Hybrid Perovskites Responsible for Intriguing Optoelectronic Properties and Higher Cell

Efficiency, Applied Physics, 2020.

[9] Two-Dimensional Correlation Analysis of Highly Spatially Resolved Simultaneous IR and Raman Spectral Imaging of Bioplastics Composite Using Optical Photothermal Infrared and Raman Spectroscopy, The Journal of Molecular Structure, 2020.

[10] Super resolution correlative far-field submicron simultaneous IR and Raman microscopy: a new paradigm in vibrational spectroscopy, Advanced Chemical Microscopy for Life Science and Translational Medicine, 2020.

[11] Submicron-resolution polymer orientation mapping by optical photothermal infrared spectroscopy, International Journal of Polymer Analysis and Characterization, 2020.

[12] Bulk to nanometre-scale infrared spectroscopy of pharmaceutical dry powder aerosols, Analytical Chemistry, 2020.

[13] Optical Photothermal Infrared Micro-Spectroscopy – A New Non-Contact Failure Analysis Technique for Identification of<10mm Organic Contamination in the Hard drive and other Electronics Industries. Microscopy Today, 2020.

[14] Spontaneous Formation of 2D-3D Heterostructures on the edges of 2D RuddlesdenPopper Hybrid Perovskite Crystals, Chemistry of Materials, 2020.

[15] Simultaneous Optical Photothermal Infrared (OPTIR) and Raman Spectroscopy of Submicrometer Atmospheric Particles, Analytical Chemistry, 2020.

[16] Detection of high explosive materials within fingerprints by means of optical-photothermal infrared spectromicroscopy, Analytical Chemistry, 2020.

[17] Polarized O-PTIR of collagen and individual fibril strands reveals orientation, Molecules Special Edition: “Biomedical Raman and Infrared Spectroscopy: Recent Advancement and Applications, 2020.

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