胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒
【簡(jiǎn)單介紹】
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | YSH3259 |
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規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
【詳細(xì)說(shuō)明】
商品屬性:
貨號(hào) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
YSH3259 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3259-1 | 50管/48樣 | 紫外分光光度法 |
商品詳情:
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒測(cè)定意義:
ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來(lái)源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。
測(cè)定原理:
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340 nm下測(cè)定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無(wú)水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。
試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。
4. 測(cè)定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測(cè)定吸光值,記為A測(cè)定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。
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