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當(dāng)前位置:天津譜祥偉業(yè)科技有限公司>>技術(shù)文章>>HPLC色譜峰異常,解決辦法看這一篇就夠了
A.峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1.篩板阻塞; | 1.a(chǎn).反沖色譜柱; b.更換進(jìn)口篩板; c.更換色譜柱; |
2.色譜柱塌陷; | 2. 填充色譜柱; |
3.干擾峰; | 3. a.使用更長的色譜柱; b.改變流動(dòng)相或更換色譜柱; |
4.流動(dòng)相pH選擇錯(cuò)誤; | 4.調(diào)整pH值,對于堿性化合物,低pH值更有利于得到對稱峰; |
5.樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng); | 5.a.加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑。b.更改色譜柱。 |
B.峰前延
原因 | 解決辦法 |
1.柱溫低; | 1.升高柱溫; |
2.樣品溶劑選擇不恰當(dāng); | 2.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑; |
3.樣品過載; | 3.降低樣品含量; |
4.色譜柱損壞; | 4.見A1、A2; |
C.峰分叉
原因 | 解決辦法 |
1.保護(hù)柱或分析柱污染; | 1.取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析;如果必要更換保護(hù)柱;如果分析柱阻塞,拆下來清洗;如果問題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?;如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。 |
2.樣品溶劑不溶于流動(dòng)相; | 2.改變樣品溶劑;如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑; |
D.峰變形
原因 | 解決辦法 |
1.樣品過載; | 1.減少樣品載量; |
E.早出的峰變形
原因 | 解決辦法 |
1.樣品溶劑選擇不恰當(dāng); | 1. a.減少進(jìn)樣體積; b.運(yùn)用低極性樣品溶劑; |
F.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因 | 解決辦法 |
1.柱外效應(yīng); | 1. a.調(diào)整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路); b.使用小體積的流通池; |
G.K’增加時(shí),脫尾更嚴(yán)重
原因 | 解決辦法 |
1.二級保留效應(yīng),反相模式; | 1. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入鹽或緩沖劑(或離子化樣品); d.更換一支柱子; |
2.二級保留效應(yīng),正相模式; | 2. a.加入三乙胺(或堿性樣品); b.加入乙酸(或酸性樣品); c.加入水(或多官能團(tuán)化合物); d.試用另一種方法; |
3.二級保留效應(yīng),離子對; | 3.加入三乙胺(或堿性樣品); |
H.酸性或堿性化合物的峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1.緩沖不合適; | a.使用濃度50~100mM的緩沖液; b.使用P ka等于流動(dòng)相pH值的緩沖液; |
I.額外的峰
原因 | 解決辦法 |
1.樣品中有其他組份; | 1.正常; |
2.前一次進(jìn)樣的洗脫峰; | 2. a.增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率; b.提高流速; |
3.空位或鬼峰; | 3. a.檢查流動(dòng)相是否純凈; b.使用流動(dòng)相作為樣品溶劑; c.減少進(jìn)樣體積; |
J.保留時(shí)間波動(dòng)
原因 | 解決辦法 |
1.溫控不當(dāng); | 1.調(diào)好柱溫; |
2.流動(dòng)相組分變化 | 2.防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等); |
3.色譜柱沒有平衡; | 3.在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱; |
K.保留時(shí)間不斷變化
原因 | 解決辦法 |
1.流速變化; | 1.重新設(shè)定流速; |
2.泵中有氣泡; | 2.從泵中除去氣泡; |
3.流動(dòng)相選擇不恰當(dāng); | 3. a.更換合適的流動(dòng)相; b.選擇合適的混合流動(dòng)相; |
L.基線漂移
原因 | 解決辦法 |
1.柱溫波動(dòng);(即使很小的溫度變化都會(huì)引起基線波動(dòng);通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器;) | 1.控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器; |
2.流動(dòng)相不均勻;(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移) | 2.使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑;流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣; |
3.流通池被污染或有氣體; | 3.用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池;如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸) |
4.檢測器出口阻塞;(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線) | 4.取出阻塞物或更換管子;參考檢測器手冊更換流通池窗; |
5.流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化; | 5.更改配比或流速;為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速; |
6.柱平衡慢,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí); | 6.用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10~20倍體積的新流動(dòng)相對柱子進(jìn)行沖洗; |
7.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成; | 7.檢查流動(dòng)相的組成;使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑; |
8.樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。 | 8.使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。 |
9.使用循環(huán)溶劑,但檢測器未調(diào)整。 | 9.重新設(shè)定基線;當(dāng)檢測器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相; |
10.檢測器沒有設(shè)定在大吸收波長處; | 10.將波長調(diào)整至大吸收波長處; |
M.基線噪音(規(guī)則的)
原因 | 解決辦法 |
1.在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣; | 1.流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣; |
2.漏液 | 2.見第三部分;檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。 |
3.流動(dòng)相混合不* | 3.用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 |
4.溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱) | 4.減少差異或加上熱交換器 |
5.在同一條線上有其他電子設(shè)備 | 5.斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。 |
6.泵振動(dòng) | 6.在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 |
N.基線噪音(不規(guī)則的)
原因 | 解決辦法 |
1.漏液 | 1.見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。 |
2.流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 | 2.檢查流動(dòng)相的組成。 |
3.流動(dòng)相各溶劑不相溶 | 3.選擇互溶的流動(dòng)相 |
4.檢測器/記錄儀電子元件的問題 | 4.斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。 |
5.系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 | 5.用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) |
6.檢測器內(nèi)有氣泡 | 6.清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 |
7、流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。) | 7.用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池 |
8.檢測器燈能量不足 | 8.更換燈 |
9.色譜柱填料流失或阻塞 | 9.更換色譜柱 |
10.流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 | 10.維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置 |
O.寬峰
原因 | 解決辦法 |
1.流動(dòng)相組成變化 | 1.重新制備新的流動(dòng)相 |
2.流動(dòng)相流速太低 | 2.調(diào)節(jié)流速 |
3.漏液(特別是在柱子和檢測器之間) | 3.見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 |
4.檢測器設(shè)定不正確 | 4.調(diào)整設(shè)定 |
5.柱外效應(yīng)影響 a.柱子過載 b.檢測器對反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大 c.柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大 d.記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長 | 5. a.小體積進(jìn)樣(例如:10μl而不是100μl)以1:10或1:100的比例稀釋樣品 b.減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池 c.使用內(nèi)徑為0.007~0.01的短管路 d.減少響應(yīng)時(shí)間 |
6.緩沖液濃度太低 | 6.增加濃度 |
7.保護(hù)柱污染或失效 | 7.更換保護(hù)柱 |
8.色譜柱污染或失效,塔板數(shù)較低 | 8.更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 |
9.柱入口塌陷 | 9.打開柱入口,填補(bǔ)塌陷或更換柱子 |
10.呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被*分離的物質(zhì)的峰 | 10.選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 |
11.柱溫過低 | 11.提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過75℃ |
12.檢測器時(shí)間常數(shù)太大 | 12.使用較小的時(shí)間常數(shù) |
P.分離度降低
原因 | 解決辦法 |
1.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化) | 1.重新配置流動(dòng)相 |
2.保護(hù)柱或分析柱阻塞 | 2.去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。 |
Q.所有的峰面積都太小
原因 | 解決辦法 |
1.檢測器衰減設(shè)定過高 | 1.減少衰減的設(shè)定 |
2.檢測器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大 | 2.設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù) |
3.進(jìn)樣量太少 | 3.增大進(jìn)樣量 |
4.記錄儀連接不當(dāng) | 4.使用正確的連接 |
R.所有峰面積都太大
原因 | 解決辦法 |
1.檢測器衰減設(shè)定過低 | 1.采取較大的衰減 |
2.進(jìn)樣過多 | 2.減少進(jìn)樣量 |
3.記錄儀連接不正確 | 3.正確連接記錄儀 |
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