液相色譜柱的活化和保養(yǎng)

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質(zhì)能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長色譜柱的使用壽命。

反相色譜柱：使用新的C18柱時，先用甲醇或乙腈沖洗20-30個柱體積，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）沖洗10個柱體積，然后再用流動相平衡10-30柱體積

正相色譜柱：新柱用流動相平衡20-30個柱體積

離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用甲醇或乙腈沖洗20個柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動相平衡

Thermo部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流動相中，用于反相色譜時，先用異丙醇或乙醇沖洗色譜柱50-100個柱體積

當(dāng)用HILIC模式時，新柱用50倍柱體積50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流動相平衡20個柱體積

反相柱：甲醇或乙腈保存

正相柱：異丙醇或正己烷保存

離子交換柱：甲醇，或大于40%的有機(jī)相保存

切忌用緩沖鹽保存色譜柱

反相C18色譜柱

清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗，如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機(jī)相/水沖洗20個柱體積，然后再轉(zhuǎn)換到有機(jī)相沖洗20個柱體積

再生：用水，甲醇，甲醇，水分別沖洗20個柱體積，在第一次用水時，進(jìn)樣5次200 μL二氯亞砜DMSO

正相色譜柱

清洗：每次清洗都用低流速起步，當(dāng)檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。先用10柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強(qiáng)溶劑反沖色譜柱。

再生：用四氫呋喃，甲醇，四氫呋喃，二氯甲烷，正己烷分別沖洗20個柱體積

離子色譜柱

清洗：用水沖洗30個柱體積去除鹽，然后用甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中

再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗（濃度可以是5-10倍，不超過1M），然后再用水洗，乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。

· 使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）
· 注意色譜的pH范圍，大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8

· 避免流動相組成及極性的劇烈變化

· 使用HPLC級試劑，流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

· 如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實驗完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙腈中

· 壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號

· 確認(rèn)流動相中緩沖鹽的溶解性

· 確認(rèn)樣品在流動相中的溶解性

· 避免壓力的突變