液相色譜方法優(yōu)化——色譜柱的優(yōu)化

液相方法優(yōu)化中的色譜柱的優(yōu)化就是色譜柱的選型。選型的原則無(wú)非就是根據(jù)分析物的性質(zhì)、流動(dòng)相的條件、初步分離的結(jié)果等來(lái)選擇合適的色譜柱。

   強(qiáng)極性樣品對(duì)于強(qiáng)極性的樣品，C18色譜柱保留弱，可以選擇碳含量更高的C18；或者選用親水的AQ C18，用純水相洗脫，會(huì)增強(qiáng)保留；再或者選用HILIC模式色譜柱。

弱極性樣品

對(duì)于弱極性的樣品，C18色譜柱保留很強(qiáng)或常規(guī)有機(jī)相洗脫不下來(lái)，可以嘗試碳含量更低的色譜柱，或者苯己基，C8，C4等。

易污染樣品

對(duì)于中藥類(lèi)或生物類(lèi)樣品，色譜柱容易被污染，可以嘗試大孔徑填料色譜柱更耐污染；

 在分離度要求不高的前提下，也可以用粒徑更大的色譜柱，柱壓較低，隨著污染柱壓升高的空間比較大；

對(duì)于分離要求高，且容易柱壓高的分離項(xiàng)目，可以嘗試粒徑更大的實(shí)心核填料的色譜柱，柱效與小粒徑填料的色譜柱相當(dāng)，柱壓更低。

對(duì)于易污染色譜柱的樣品，可以的話盡量多做一些樣品前處理工作。

大分子樣品

對(duì)于大分子的分析物，尤其是空間結(jié)構(gòu)大，比如多肽、蛋白、核酸，聚合物等，選用大孔徑填料的色譜柱。

樣品pKa

我們通常根據(jù)分析物的pKa來(lái)選擇流動(dòng)相的pH，如果分析物pKa小于7，那么流動(dòng)相pH應(yīng)選擇低于pKa-2，如果pKa大于7，那么流動(dòng)相pH應(yīng)選擇高于pKa+2，但常規(guī)的硅膠基質(zhì)色譜柱耐受pH范圍為2-6，我們就根據(jù)流動(dòng)相的pH來(lái)選擇可耐受相應(yīng)pH的色譜柱。

高柱溫

如果柱溫要求超過(guò)50℃，需要選擇耐高溫的色譜柱。

分離度差

對(duì)于分離度差的結(jié)果，我們可以嘗試增加柱長(zhǎng)，來(lái)提高分離度。

塔板數(shù)低對(duì)于塔板數(shù)低的結(jié)果，我們嘗試減小色譜柱內(nèi)徑或填料粒徑，來(lái)提高柱效。

塔板數(shù)低

對(duì)于塔板數(shù)低的結(jié)果，我們嘗試減小色譜柱內(nèi)徑或填料粒徑，來(lái)提高柱效。