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細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的具體步驟剖析
閱讀：1088 發(fā)布時(shí)間：2018-8-28
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的具體步驟剖析
一、復(fù)蘇
1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)瓶的15ml的離心管中（用培養(yǎng)瓶把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái)），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5.三天換一次培養(yǎng)基。
二、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。
4.細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來(lái)。
6.把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)瓶，把細(xì)胞都吹起來(lái)。
8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來(lái)并離心。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來(lái)，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫(xiě)明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過(guò)夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20S+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。