免疫酶標(biāo)固相載體方法

免疫酶技術(shù)ELISA法是一項(xiàng)先進(jìn)的免疫化學(xué)測(cè)定技術(shù)，自20世紀(jì)60年中期問(wèn)世70年代初發(fā)展以來(lái)，引起了許多學(xué)者有關(guān)技術(shù)人員的重視。這是因?yàn)槊庖呙讣夹g(shù)有其*的優(yōu)點(diǎn).

免疫酶標(biāo)固相載體方法，根據(jù)固相載體的不同，一般分為三類(lèi)，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）和*抗原底物珠（Defined Antigen Substrate Spheres,簡(jiǎn)稱(chēng)DASS）體系測(cè)定。后來(lái)又發(fā)展出纖維素薄膜作為載體的ELISA檢測(cè)法，俗稱(chēng)Dot-ELISA.。ELISA和Dot-ELISA的差別主要是所用載體不同，由于纖維素薄膜比聚苯乙烯具有更多的優(yōu)點(diǎn)，因此目前Dot-ELISA的使用越來(lái)越廣泛。

一，固相載體

任何適用于放射免疫測(cè)定的固相載體（也稱(chēng)為固體相），均可用于免疫酶標(biāo)固相載體的方法中。

免疫酶技術(shù)中使用的固相載體一般分為兩類(lèi)，一類(lèi)是具有疏松結(jié)構(gòu)的小球狀物質(zhì)，另一類(lèi)是塑料平板或管。

小球狀物載體

在免疫酶技術(shù)中，使用zui早的疏松的小球狀物載體是微晶纖維素（Micro-crystalline Cellulose），后來(lái)逐漸使用瓊脂糖珠（Sepharose 4B），形成*抗原底物珠（Defined Antigen Substrate Spheres，簡(jiǎn)稱(chēng)DASS）體系。瓊脂糖珠經(jīng)活化后，抗體或抗原蛋白質(zhì)是通過(guò)共價(jià)鍵與小珠結(jié)合的，結(jié)合方式如下：

通過(guò)CNBr共價(jià)偶合的抗原或抗體形成的結(jié)合物是穩(wěn)定的，但是在一系列處理過(guò)程中，操作復(fù)雜，標(biāo)記酶容易失活，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素較多，加之在測(cè)定過(guò)程中，分離和清洗懸浮小珠要經(jīng)多次離心，步驟繁瑣，因此實(shí)際應(yīng)用較少。

另外，有人曾將聚丙烯酰胺凝膠（Biogel P-300）和一定孔徑的玻璃珠（Controlled Poreglass）作為固相載體。

也有人用乙酰氯甲酸鹽（Ethylchloroformate）和戊二醛作為聚合劑，使免疫反應(yīng)物相互交聯(lián)而成為固態(tài)。

Kamefusa等發(fā)現(xiàn)，硅碎片（Silicon Pieces）作為載體，物理吸附穩(wěn)定，制作簡(jiǎn)易且價(jià)格低廉。

大多數(shù)小球狀物載體很難適合于免疫酶技術(shù)的大規(guī)模檢測(cè)。