寨卡病毒IgM抗體ELISA 96T/盒
【簡(jiǎn)單介紹】
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥,綜合 |
用于定量測(cè)定人血漿和血清中的寨卡病毒(ZIKA)的IgM抗體。僅用于“體外"診斷。
【詳細(xì)說明】
寨卡病毒IgM抗體ELISA 96T/盒
樣本:(血清和血漿)
- 僅用于“體外"診斷
【健侖生物】
A.使用
酶免疫測(cè)定(ELISA),用于定量測(cè)定人血漿和血清中的寨卡病毒(ZIKA)的IgM抗體。僅用于“體外"診斷。
B.引言
寨卡病毒屬于黃病毒科和黃病毒屬,因此與登革熱,黃熱病,日本腦炎和西尼羅病毒有關(guān)。像其他黃病毒一樣,寨卡病毒是包膜和二十面體的,并且具有非分段的單鏈,正義RNA基因組。RNA基因組基因編碼非結(jié)構(gòu)蛋白和結(jié)構(gòu)蛋白,其具免疫原性的是NS1和ENV抗原。結(jié)構(gòu)蛋白封裝病毒。有兩個(gè)寨卡病毒譜系:非洲譜系和亞洲譜系。系統(tǒng)發(fā)育研究表明,在美洲的病毒傳播與亞洲菌株密切相關(guān),在2013年爆發(fā)期間在法屬波利尼西亞傳播。
寨卡病毒通過白天活躍的蚊子作為其載體傳播。它主要由雌性埃及伊蚊傳播以產(chǎn)卵,但是已經(jīng)從伊蚊屬中的許多樹木類蚊子中分離出來,在蚊子中具有約10天的外部潛伏期。
自2015年以來,新聞報(bào)導(dǎo)提請(qǐng)注意Zika在拉丁美洲和加勒比地區(qū)的傳播。
2015年,在其胎兒有小頭癥的兩名孕婦的羊水中檢測(cè)到寨卡病毒RNA,表明病毒已經(jīng)越過胎盤,可能造成母嬰感染。
根據(jù)世衛(wèi)組織2016年2月5日,寨卡病毒和小頭癥之間的因果關(guān)系“被強(qiáng)烈懷疑但尚未科學(xué)證明"和“盡管巴西的小頭癥病例與寨卡爆發(fā)有時(shí)空相關(guān)性,更強(qiáng)有力的調(diào)查和需要進(jìn)行研究以更好地理解這種潛在的聯(lián)系。
新的建議包括向沒有Zika發(fā)燒癥狀的孕婦提供血清學(xué)測(cè)試,這些癥狀在過去2-12周內(nèi)從正在進(jìn)行的寨卡病毒傳播的地區(qū)返回;對(duì)于沒有寨卡癥狀的孕婦,他們建議在孕期第五個(gè)月開始進(jìn)行產(chǎn)前保健和隨訪測(cè)試。
C.測(cè)試原理
微板用與其它黃病毒顯示最小交叉反應(yīng)性的Zika病毒NS1合成抗原包被。
在第一次孵育中,用稀釋的樣品處理固相,并且抗原捕獲抗ZIKV IgM(如果存在的話)。在洗掉樣品的所有其它組分后,在第二孵育中,通過加入用過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hIgM抗體來檢測(cè)結(jié)合的抗ZIKV IgM。在固相上捕獲的作用于底物/色原混合物上的酶產(chǎn)生與樣品中存在的抗ZIKV IgM抗體的量成比例的光學(xué)信號(hào)。
在測(cè)定中進(jìn)行IgG抗ZIKV的中和,直接在孔中進(jìn)行,以在IgM的測(cè)定中阻斷由于這類抗體的干擾。
D.組件
每個(gè)試劑盒包含足夠的試劑進(jìn)行96次測(cè)試。
微孔板:MICROPLATE
12條×8個(gè)用ZIKV特異性合成NS1抗原包被的微孔。將板密封到具有干燥劑的袋中。
2.負(fù)控制控制 -
1x2.0ml /瓶。準(zhǔn)備使用控制。其含有1%山羊血清蛋白,10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.5%吐溫20,0.09%迭氮化鈉和0.1%Kathon GC作為防腐劑。陰性對(duì)照是黃色編碼的。
正控制CONTROL +
1x2.0ml /瓶。準(zhǔn)備使用控制。其含有1%山羊血清蛋白,滅活的人抗ZIKV IgM,10mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.0 +/- 0.1,0.5%吐溫20,0.09%迭氮化鈉和0.1%Kathon GC作為防腐劑。
陽性對(duì)照是深綠色編碼。
4.洗滌緩沖液濃縮液:WASHBUF 20X
1x60ml /瓶20x濃縮溶液。一旦稀釋,洗滌溶液含有10mM磷酸鹽緩沖液pH 7.0 +/- 0.2,0.05%Tween 20和0.05%Kathon GC。
酶聯(lián)液:CONJ
1x16ml /瓶。準(zhǔn)備使用和紅色編碼。其含有針對(duì)人IgM,5%BSA,10mM Tris緩沖液pH 6.8 +/- 0.1,0.1%Kathon GC和0.02%硫酸qing大霉素的辣根過氧化物酶綴合的多克隆抗體作為防腐劑。
6.色原/基質(zhì):SUBS TMB
1x16ml /瓶。其含有50mM檸檬酸鹽 - 磷酸鹽緩沖液pH 3.5-3.8,4%二甲基亞砜,0.03%四甲基聯(lián)苯胺(或TMB)和0.02%過氧化氫(或H 2 O 2)。
注意:要防止光存儲(chǔ),對(duì)強(qiáng)烈的照明敏感。
7.硫酸:H 2 SO 4 0.3M
1×15ml /瓶含有0.3M H 2 SO 4溶液。
注意:刺激性(H315,H319; P280,P302 + P352,P332 + P313,P305 + P351 + P338,P337 + P313,P362 + P363)。
8.標(biāo)本稀釋液:DILSPE
2x60ml /瓶。其含有2%酪蛋白,10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.2%吐溫20,0.09%迭氮化鈉和0.1%Kathon GC作為防腐劑。用于稀釋樣品。
9.中和試劑:SOLN NEUT
1x8ml /瓶。其含有山羊抗hIgG,2%酪蛋白,10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.09%迭氮化鈉和0.1%Kathon GC作為防腐劑。
10.板密封箔n°2
11.包裝插入n°1
E.材料需要但不提供
1.校準(zhǔn)微量移液器(1000,100和10ul)和一次性塑料吸頭。
2. EIA水(雙蒸餾水或去離子水,經(jīng)處理以除去用作消毒劑的氧化性化學(xué)品的木炭)。
3.定時(shí)器有60分鐘或更高的范圍。
4.吸收紙巾。
5.校準(zhǔn)的ELISA微孔板恒溫培養(yǎng)箱(干或濕)設(shè)置在+ 37℃(+/- 0.5℃公差)。
6.校準(zhǔn)的ELISA微孔讀數(shù)器,具有450nm(讀數(shù))和620-630nm(消隱)濾器。
7.校準(zhǔn)的ELISA微孔板洗滌器。
8.渦流或類似的混合工具。
F.警告和注意事項(xiàng)
1.只有在負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)生的監(jiān)督下,才能由經(jīng)過專門培訓(xùn)的技術(shù)人員使用該試劑盒。
2.參與實(shí)驗(yàn)的所有人員必須佩戴防護(hù)實(shí)驗(yàn)服,不含滑石的手套和眼鏡。應(yīng)避免使用任何尖銳(針)或切割(刀片)設(shè)備。根據(jù)美國(guó)亞特蘭大疾病控制中心的建議,所有參與的人員應(yīng)接受生物安全程序的培訓(xùn),并在國(guó)家衛(wèi)生研究所的出版物“生物安全微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室"。
3.所有參與樣品處理的人員都應(yīng)接種HBV和HAV疫苗,為疫苗提供安全和有效的疫苗。
4.在打開試劑盒和微量培養(yǎng)板以及進(jìn)行試驗(yàn)時(shí),應(yīng)控制實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,以避免污染物,如灰塵或空氣中的微生物制劑。保護(hù)色原/基板(或TMB)免受強(qiáng)光照射,避免進(jìn)行測(cè)試的臺(tái)面振動(dòng)。
5.收到后,將套件在2..8°C下存放在溫度控制的冰箱或冷藏室中。
6.不要在不同批次的試劑盒之間交換組件。建議同一批次的兩個(gè)套件之間的組件不應(yīng)互換。
7.檢查試劑是否清澈,不含可見的重顆?;蚓奂?。如果沒有,建議實(shí)驗(yàn)室主管啟動(dòng)套件更換的必要程序。
8.使用一次性吸頭避免血清/血漿樣品之間的交叉污染,并在每個(gè)樣品后更換。
9.通過使用一次性吸頭并在每次使用之間更換它們,避免試劑盒試劑之間的交叉污染。
10.不要在外部容器和內(nèi)部(小瓶)標(biāo)簽上規(guī)定的有效期后使用試劑盒。對(duì)已打開的試劑盒進(jìn)行的研究沒有指出任何相關(guān)的活性損失,多達(dá)6次使用該裝置和長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月。
11.將所有標(biāo)本視為潛在感染性。所有人血清標(biāo)本應(yīng)按照美國(guó)亞特蘭大疾病控制中心的建議,按照健康研究所出版物“微生物和生物實(shí)驗(yàn)室生物安全"(Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories)中所述,在生物安全2級(jí)處理。
12.在制備液體組分或?qū)⒔M分轉(zhuǎn)移到自動(dòng)化工作站時(shí),建議使用一次性塑料制品,以避免交叉污染。
13.在使用試劑盒期間產(chǎn)生的廢物必須按照關(guān)于化學(xué)和生物物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室廢物的國(guó)家指令和法律進(jìn)行廢棄。特別地,從洗滌過程產(chǎn)生的液體廢物,來自對(duì)照/校準(zhǔn)物的殘余物和來自樣品的液體廢物必須作為潛在感染性物質(zhì)處理并在廢物之前失活。建議的滅活方法是用10%最終濃度的家用漂白劑處理16-18小時(shí)或者通過在121℃下高壓滅菌20分鐘進(jìn)行熱滅活。
14.樣品和操作的意外泄漏必須用浸有家用漂白劑,然后用水浸濕的紙巾吸附。然后應(yīng)將組織丟棄在zhi定用于實(shí)驗(yàn)室/醫(yī)院廢物的適當(dāng)容器中。
15.硫酸是刺激劑。如發(fā)生溢出,用大量水沖洗表面。
16.使用試劑盒產(chǎn)生的其他廢物(例如:用于樣品和對(duì)照品/校準(zhǔn)品的提示,用過的微量培養(yǎng)板)應(yīng)作為潛在的傳染性物質(zhì)處理,并根據(jù)國(guó)家有關(guān)實(shí)驗(yàn)室廢物的指令和法律處理。
G.樣品:準(zhǔn)備和警告
1.通過靜脈穿刺無菌抽取血液,并使用用于臨床實(shí)驗(yàn)室分析的樣品制備的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備血漿或血清。在用檸檬酸鹽,EDTA和肝素制備樣品中沒有觀察到影響。
2.樣品必須用代碼或名稱清楚標(biāo)識(shí),以避免誤解結(jié)果。強(qiáng)烈建議使用條形碼卷標(biāo)和電子閱讀。
3.溶血(“紅色")和明顯高脂血癥(“乳白色")樣品必須丟棄,因?yàn)樗鼈兛赡墚a(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。含有纖維蛋白或重顆?;蛭⑸锛?xì)絲和體的殘留物的樣品應(yīng)被丟棄,因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
血清和血漿可以在收集后在+ 2°.8°C儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)五天。對(duì)于較長(zhǎng)的儲(chǔ)存期,樣品可以在-20℃冷凍儲(chǔ)存幾個(gè)月。任何冷凍樣品不應(yīng)多次冷凍/解凍,因?yàn)檫@可能產(chǎn)生可能影響測(cè)試結(jié)果的顆粒。
5.如果存在顆粒,則以2.000rpm離心20分鐘或使用0.2-0.8u過濾器過濾以清潔樣品用于測(cè)試。
H.組件和警告的準(zhǔn)備
微孔板:
使微孔板在打開容器之前達(dá)到室溫(約1小時(shí))。檢查干燥劑是否未變成深綠色,表明存儲(chǔ)有缺陷。
未使用的條必須放回鋁袋中,在干燥劑的存在下,牢固地壓縮并儲(chǔ)存在+ 2°.8°C。當(dāng)?shù)谝淮未蜷_時(shí),殘留的條帶是穩(wěn)定的,直到干燥劑袋內(nèi)的濕度指示器從黃色變?yōu)榫G色。
質(zhì)控:
準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。不要稀釋!
洗滌緩沖液:
濃縮溶液的全部?jī)?nèi)容物必須用雙重蒸餾水稀釋20倍,并在使用前輕輕地顛倒混合。在制備過程中避免起泡,因?yàn)闅馀莸拇嬖跁?huì)影響洗滌循環(huán)的效率。
注意:稀釋后,洗滌溶液在+ 2..8℃下穩(wěn)定1周
酶聯(lián)液:
可以使用。使用前在渦流上充分混合。
小心不要用氧化性化學(xué)品,空氣驅(qū)動(dòng)的灰塵或微生物污染液體。
如果該組分必須轉(zhuǎn)移,則僅使用塑料,可能是無菌的一次性容器。
色原/底物:
可以使用。使用前在渦流上充分混合。
小心不要用氧化性化學(xué)品,空氣驅(qū)動(dòng)的灰塵或微生物污染液體。
不要暴露在強(qiáng)烈的照明,氧化劑和金屬表面。
如果該部件必須轉(zhuǎn)移,只使用塑料,可能無菌的一次性容器
樣品稀釋劑
準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。
中和試劑
準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。
硫酸:
可以使用。使用前在渦流上充分混合。
注意:刺激性(H315,H319; P280,P302 + P352,P332 + P313,P305 + P351 + P338,P337 + P313,P362 + P363)。
I.與工具箱組合使用的儀器和工具
1.微量移液器必須進(jìn)行校準(zhǔn),以提供測(cè)定所需的正確體積,并且必須對(duì)那些可能偶然與樣品接觸的部分進(jìn)行定期去污(家用酒精,漂白劑,醫(yī)院級(jí)消毒劑的10%溶液)。它們還應(yīng)當(dāng)定期維護(hù),以便顯示1%的精度和+/- 2%的真實(shí)性。還應(yīng)定期對(duì)工具箱部件的溢出物或殘留物進(jìn)行去污。
2. ELISA孵化器必須設(shè)置在+ 37°C(允許+/- 0.5°C),并定期檢查以確保保持正確的溫度。干燥培養(yǎng)箱和水浴適用于孵育,條件是該儀器經(jīng)過驗(yàn)證用于ELISA測(cè)試的孵育。
3. ELISA洗滌器對(duì)測(cè)定的整體性能非常重要。在使用該套件進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試之前,必須使用套件控制/校準(zhǔn)器和參考面板對(duì)洗衣機(jī)進(jìn)行仔細(xì)驗(yàn)證和正確優(yōu)化。通常4-5次洗滌循環(huán)(吸出+ 350ul /孔的洗滌溶液的分配= 1個(gè)循環(huán))足以確保測(cè)定如預(yù)期那樣進(jìn)行。建議在循環(huán)之間保持20-30秒的浸泡時(shí)間。為了正確設(shè)置它們的數(shù)量,建議使用試劑盒對(duì)照/校準(zhǔn)器和良好表征的陰性和陽性參照樣品進(jìn)行測(cè)定,并檢查以匹配以下“內(nèi)部質(zhì)量控制"部分中報(bào)告的值。必須根據(jù)制造商的說明對(duì)洗衣機(jī)的交付量和維護(hù)(針的凈化和清潔)進(jìn)行定期校準(zhǔn)。
4.孵育時(shí)間具有+ 5%的公差。
5.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定酶標(biāo)儀必須配備450nm的讀取濾光片,并配備第二個(gè)濾光片(強(qiáng)烈建議使用620-630nm)進(jìn)行消隱。其標(biāo)準(zhǔn)性能應(yīng)為(a)帶寬<10 nm; (b)0至> 2.0的吸亮度范圍; (c)線性至> 2.0;重復(fù)性> 1%。在“測(cè)定程序"部分中鑒定的孔上進(jìn)行消隱。必須定期校準(zhǔn)讀取器的光學(xué)系統(tǒng),以確保測(cè)量正確的光密度。應(yīng)根據(jù)制造商的說明定期維護(hù)。
6.當(dāng)使用ELISA自動(dòng)工作站時(shí),必須仔細(xì)設(shè)置,校準(zhǔn),控制和定期維護(hù)所有關(guān)鍵步驟(分配,孵育,洗滌,讀數(shù),數(shù)據(jù)處理),以符合“內(nèi)部質(zhì)量控制“。測(cè)定方案必須安裝在設(shè)備的操作系統(tǒng)中,并且對(duì)于洗衣機(jī)和閱讀器進(jìn)行驗(yàn)證。此外,站的液體處理部分(分配和清洗)必須被驗(yàn)證和正確設(shè)置。必須特別注意避免用于分配和用于洗滌的針?biāo)鶐ё?。這必須研究和控制,以最小化相鄰井的污染的可能性。當(dāng)待測(cè)樣品數(shù)量超過20-30個(gè)單位時(shí),推薦使用ELISA自動(dòng)工作站。
7. Dia.Pro的客戶服務(wù)為用戶提供設(shè)置和檢查與套件結(jié)合使用的儀器的支持,以確保符合所述要求。還支持安裝與套件一起使用的新儀器。
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