上海迪圖談四種常見(jiàn)PCR儀的區(qū)別

普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、 熒光定量PCR儀的區(qū)別及運(yùn)用
 
PCR：即合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)，利用DNA在體外95℃時(shí)解旋（變性），55℃時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合（退火），再調(diào)溫度至72℃左右，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈（延伸）。

PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。
根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為：普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類

①普通PCR儀
一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。
普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。

②梯度PCR儀
一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同，通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣既節(jié)約時(shí)間，也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu),檢驗(yàn)、檢疫等。
如:,ABI 9700,ABI Veriti, Bio-Rad T100 PCR儀

③原位PCR儀
PCR是提取細(xì)胞或組織中的DNA進(jìn)行基因擴(kuò)增反應(yīng)，而原位PCR是保持細(xì)胞或組織的完整性，使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測(cè)到靶DNA，而且還可以了解靶DNA存在于何種細(xì)胞中，更有利于探討靶DNA與細(xì)胞之間的關(guān)系。

原位PCR儀,主要應(yīng)用于：（1）檢測(cè)外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；（2）觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律（3）內(nèi)源性基因片段，如人體的單基病、重組基因、易位的染色體、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。（4）檢測(cè)導(dǎo)入基因；（5） 遺傳病基因檢測(cè)如β－地中海貧血。 

④實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR擴(kuò)增原理相同，在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。

熒光定量PCR儀有單通道，雙通道和多通道之分。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道；有多種熒光標(biāo)記的時(shí)候使用多通道。單通道也可以檢測(cè)多熒光的標(biāo)記和目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測(cè)一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測(cè)完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR，實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)多種目的基因的功能。