小鼠胚胎和ES細(xì)胞Sigma-Aldrich 干細(xì)胞小鼠胚胎和ES細(xì)胞培養(yǎng)

轉(zhuǎn)基因小鼠模型

轉(zhuǎn)基因和基因敲除技術(shù)是研究基因功能的強(qiáng)大工具。產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因和敲除小鼠的常用方法包括通過囊胚注射或聚集技術(shù)將遺傳修飾的胚胎干細(xì)胞引入早期小鼠胚胎。這些方法會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生嵌合體后代，如果ES細(xì)胞可分化成生殖細(xì)胞系，則遺傳修飾可以傳遞給后代。

我們提供了培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞的廣泛工具和技術(shù)，包括金標(biāo)準(zhǔn)的ESGRO/mLif 補(bǔ)充物，ESGRO*細(xì)胞培養(yǎng)基和ESGRO2i無(wú)血清/無(wú)飼養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基。我們還提供常用的小鼠胚胎培養(yǎng)基以及用于小鼠胚胎的儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)移和擴(kuò)增的EmbryoMAX™ MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞。

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加入基因組編輯*研究者團(tuán)隊(duì)

利用胚胎干細(xì)胞制備小鼠模型

圖1.  獲得遺傳修飾小鼠的一般步驟。多能ES細(xì)胞可自行購(gòu)買或從小鼠胚泡分離。ES細(xì)胞基因組可通過兩種方式進(jìn)行修飾：1）在ES細(xì)胞中表達(dá)外源基因；2）破壞內(nèi)源基因的表達(dá)。在這兩種情況下，靶向載體含有與靶基因同源的序列，以及改變靶標(biāo)和進(jìn)行陽(yáng)性/陰性篩選的序列。將修飾的ES細(xì)胞顯微注射到胚泡中。新的CRISPR / Cas9基因組編輯系統(tǒng)提供了直接顯微注射靶標(biāo)mRNA和Cas9 mRNA至受精卵的選擇。然后將胚泡注射到小鼠中產(chǎn)生嵌合體小鼠。這些小鼠與正常小鼠交配以產(chǎn)生具有所需遺傳修飾的小鼠。

 小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)

ESGRO^® mLIF添加劑

維持多能性 十多年

十多年來，干細(xì)胞研究人員相信使用ESGRO^®LIF補(bǔ)充物能夠維持其小鼠ES細(xì)胞系的多能性狀態(tài)。未分化小鼠ES細(xì)胞培養(yǎng)的金標(biāo)準(zhǔn)ESGRO^®mLIF有如下特點(diǎn)：

• *的ES細(xì)胞分化抑制，獲得可靠的效果
• 方便的包裝規(guī)格，以活性單位/毫升形式提供
• 無(wú)批間差異，獲得更佳的重復(fù)性
• 靈活; 支持無(wú)飼養(yǎng)層和基于飼養(yǎng)層的細(xì)胞培養(yǎng)

堿性磷酸酶染色表明，ESGRO®補(bǔ)充物可抑制mES細(xì)胞分化。

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無(wú)血清和無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基

ESGRO Complete™ PLUS培養(yǎng)基

ESGRO Complete™系統(tǒng)是*個(gè)能夠無(wú)血清、無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)小鼠ES細(xì)胞的系統(tǒng)。該系統(tǒng)的基礎(chǔ)是ESGRO Complete™克隆級(jí)培養(yǎng)基，通過提供基本營(yíng)養(yǎng)成分（在傳統(tǒng)培養(yǎng)方法中，通常由血清和飼養(yǎng)層細(xì)胞提供）支持小鼠ES細(xì)胞的自我更新。這些營(yíng)養(yǎng)成分包括激素、維生素、生長(zhǎng)因子mLIF和BMP4，以及選擇性GSK3β抑制劑，以在無(wú)血清條件下提高小鼠ES細(xì)胞生長(zhǎng)和活力。

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ESGRO^®-2i 培養(yǎng)基

基于使用LIF與GSK3β和Mek 1/2小分子抑制劑建立和維持ES細(xì)胞 “多能性基態(tài)1-3”狀態(tài)的原理，ESGRO-2i培養(yǎng)基或補(bǔ)充物于維持“初始狀態(tài)” 或“基態(tài)”培養(yǎng)條件，增強(qiáng)ES細(xì)胞的活力和易培養(yǎng)性，并可在沒有血清和飼養(yǎng)層細(xì)胞的情況下增強(qiáng)維持多能性。

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在ESGRO®-2i培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的小鼠ES細(xì)胞，表達(dá)多能性標(biāo)記物Oct-4，Sox-2和SSEA1（從左至右）。

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 MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞

PMEF細(xì)胞的EmbryoMax系列為研究人員提供了一種方便的ES細(xì)胞培養(yǎng)解決方案，無(wú)需進(jìn)行耗時(shí)的MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞分離和制備。這些細(xì)胞來源于第13天的胚胎，經(jīng)過3次傳代（每次傳代有2次群體倍增）后冷凍于小瓶中。5瓶裝供應(yīng)，每個(gè)小瓶含有約5-6×10⁶個(gè)成纖維細(xì)胞。
 

 小鼠胚胎培養(yǎng)基

在胚胎收集、操作和轉(zhuǎn)移應(yīng)用中，我們可提供多種小鼠胚胎培養(yǎng)基和試劑，包括M2、改良的M16、FHM和專有的KSOM培養(yǎng)基配方。我們的培養(yǎng)基在小鼠胚胎上進(jìn)行過測(cè)試，并使用高質(zhì)量的原料制造。許多經(jīng)典配方都包含有液體和粉末形式的EmbryoMax培養(yǎng)基。

胚胎發(fā)育階段

熱門胚胎培養(yǎng)基

M2  |  M16  |  FHM  |  KSOM  |  HTF  |  Mineral Oil  |  BSA  |  透明質(zhì)酸酶

新產(chǎn)品聚焦

EmbryoMax® KSOM胚胎培養(yǎng)基           KSOM胚胎培養(yǎng)基是原始KSOM配方的新型*的緩沖液改良版： 一種既可在大氣條件下處理胚胎，又可在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)胚胎的培養(yǎng)基。 在多個(gè)小鼠品系中具有較高的胚泡形成頻率 無(wú)需進(jìn)行培養(yǎng)基預(yù)平衡步驟 立即訂購(gòu)

 小鼠基因分型

KOD Xtreme™ 熱啟動(dòng)DNA聚合酶

用少的步驟從困難的粗提樣品進(jìn)行DNA擴(kuò)增

KOD Xtreme™熱啟動(dòng)DNA聚合酶是您應(yīng)對(duì)困難PCR情況，適用于：對(duì)來自粗提樣品（如小鼠尾尖裂解物）的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)可抑制或造成PCR擴(kuò)增數(shù)據(jù)偏倚的高GC含量或重復(fù)序列（T / A）進(jìn)行擴(kuò)增。

特性和優(yōu)點(diǎn)：

• 經(jīng)過優(yōu)化，可用少的步驟對(duì)復(fù)雜的粗提樣品成功進(jìn)行PCR
• 可高效擴(kuò)增高達(dá)90%GC含量的模板
• 具有高于Taq混合物十倍的保真度
• 可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)24kb的基因組靶標(biāo)
• 可擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)40kb的質(zhì)粒/噬菌體靶標(biāo)
• 可避免引物錯(cuò)配或形成引物二聚體
• 兼容自動(dòng)化工作流程的方便的環(huán)境溫度設(shè)置

用少的步驟擴(kuò)增來自粗提組織裂解物的DNA，從而節(jié)省時(shí)間并在保持高質(zhì)量數(shù)據(jù)的同時(shí)大限度降低成本。
 

用多種PCR酶從經(jīng)堿裂解制備的小鼠尾裂解物中擴(kuò)增靶基因。KOD Xtreme™熱啟動(dòng)DNA聚合酶成功擴(kuò)增了兩個(gè)靶基因（Tg和WT）。

立即訂購(gòu)KOD Xtreme